RT, Reptilázový test; Reptilase time, Bathroxobin time  

Vyšetření se provádí z citrátové plazmy chudé na destičky, která se získá odběrem žilní krve do zkumavky s citrátem sodným v poměru 1 díl citrátu + 9 dílů krve. Koncentrace citrátu se doporučuje v rozmezí 0,105 až 0,109 mol/l. Při venepunkci je doporučeno používat jehlu o průměru 0,7 až 1,0 mm (tenčí jehly mohou způsobit hemolýzu a předčasnou aktivaci destiček a koagulačních faktorů) a je nutné vyvarovat se použití škrtidla déle než 1 min. Doprava vzorku do laboratoře do 2 h. Stabilita plazmy je 4 h při 15 až 25 °C. V případě léčby heparinem se doporučuje oddělit plazmu do 30 min; vzorek se centrifuguje 10 min při 1800 až 2500 g, nejlépe dle doporučení výrobce odběrového systému.

V případě zmrazení plazmy lze skladovat 4 týdny při -20 °C nebo 6 měsíců při -70°C . Pro následné zpracování zmrazené plazmy je nutno plazmu rozmrazovat po dobu cca 5 min ve vodní lázni cca 37 °C, šetrně promíchat a ihned provést měření. Rozmražené vzorky plazmy nelze opakovaně zamrazovat.

Batroxobin neboli reptiláza je enzym z hadího jedu brazilského chřestýše Bothrops atrox, jedná se o proteázu podobnou trombinu. Na rozdíl od něho štěpí z fibrinogenu jenom fibrinopeptid A a nemá aktivitu k dalším trombinovým substrátům. Funkční aktivita enzymu se udává v jednotkách BU (Bathroxobin unit). Použití testu je podobné jako u trombinového času, ale reptilázový čas není citlivý na přítomnost inhibitorů trombinu (heparin, fibrin/fibrinogen degradační produkty).

Reptilázový čas se stanovuje tak, že se k plazmě chudé na destičky přidá reptiláza (bez fosfolipidů a vápenatých iontů) a sleduje se čas koagulace. Nedostatek FXIII, a ani ostatních koagulačních faktorů, nemá vliv na hodnotu trombinového času.

Nejčastější typ detekce je optický (turbidimetrie) a mechanický (kovová kulička v magnetickém poli). Obě metody mají své výhody i nevýhody. Optické metody jsou finančně méně náročné, jelikož stačí obvykle 150 µl reakční směsi v kyvetě, kdež to u mechanické detekce je nutný objem větší, aby se kulička celá ponořila. Mechanická detekce není závislá na zbarvení, resp. zakalení vzorku (ikterické, chylózní, hemolytické vzorky), což lze u optické metody minimalizovat detekci při 671 nm.

Toleranční limit EHK: metoda není zavedena v kontrolních cyklech EHK v ČR.

Prodloužení či zkrácení koagulačního času: nepřesně odebrané vzorky s odchylkou ±10 %.

Zkrácení koagulačního času: přítomnost sraženiny, špatný odběr.

Prodloužení koagulačního času: fyziologicky u novorozenců, silná hemolýza, ikterická či chylózní plazma; dysfibrinogenémie, vrozené hypofibrinogenémie (hladina fibrinogenu < 0,6 g/l), získané hypofibrinogenémie (diseminovaná intravaskulární koagulopatie, choroby jater, fibrinolýza) či afibrinogenémie; imunoglobuliny u mnohočetného myelomu a revmatoidní artritidy); zvýšená hladina antitrombinu, protilátky proti hovězímu trombinu, hypoalbuminémie.