microalbuminuria, oligoalbuminuria

Vyšetření ze středního proudu první ranní moče, bez předchozí tělesné námahy. Vhodné jsou tři vzorky během 6 měsíců. Vhodnější je sběr přes noc (minimálně 6 h). Uvádí se také možnost 24 h sběru. Moč je stálá 7 d při 15 – 25 °C, 4 – 6 týdnů při 4 – 8 °C, > 6 měsíců při -20 °C.

Ke kvalitativnímu průkazu slouží proužky s detekcí 20, 50 a 100 mg/l (odečítání po 1 min). Proužek obsahuje protilátku s imobilizovaným koloidním zlatem. Specifita 94 %, senzitivita 94 %. Pozitivní nález je třeba potvrdit kvantitativním vyšetřením.

Radiální imunodifuze používala protilátku ukotvenou v agarovém gelu a po imunoreakci a vybarvení se měřila velikost precipitačního prstence (precipitace při rovnováze Ag-Ab). Tento postup má dnes jen historický význam.

Fotometrie Pyrogalolová červeň s molybdenanem sodným tvoří komplex s bílkovinou, který absorbuje při 600 nm. Detekce se provádí v režimu E. P. Samotné vstupní reaktanty pyrogalolová červeň a molybdenan sodný absorbují při 460 nm. Rozsah měření na základě dvoubodové kalibrace je 35 – 3000 mg/l (vyšší koncentrace se ředí fyziologickým roztokem 1+1). Při stanovení interferuje heparin, hematurie, zbytky bílkovin a mycích prostředků na skle.

Imunoturbidimetrie měří nerozpustné komplexy antigen-protilátka, které vznikají imunoreakcí s protilátkou. Proces je urychlen polyetylénglykolem. Metoda je vhodná pro rychlou analýzu velkého počtu vzorků na automatickém analyzátoru. Sérum se naředí TRIS pufrem a přidá se kozí protilátka proti lidskému albuminu (může být vázána na částicích, obvykle latexových; PETINIA = Particle-enhanced turbidimetric inhibition immunoassay je homogenní kompetitivní imunoanalýza). Imunoreakcí vznikají nerozpustné komplexy, které tvoří zákal a ten se měří fotometricky při 340 nm nebo 340/700 nm. Rozsah měření na základě šestibodové (pětibodové) kalibrace je 5 (3) – 300 (100 nebo 420) mg/l (vyšší koncentrace nutno ředit). Mez detekce je 4,6 (1,3) mg/l albuminu. Preciznost v sérii < 3,07 %, mezi sériemi < 4,91 % (celkem 1,06 – 2,07 %). Efekt nadbytku antigenu se projevuje při koncentraci > 6000 g/l (nebo také se neprojevuje vůbec).

Imunonefelometrie vychází z toho, že komplexy antigen-protilátka rozptylují světlo více než volný antigen. Proces je urychlen polyetylénglykolem. Pro imunoreakci se používá králičí antisérum vůči lidskému albuminu. Imunoreakce trvá 6 min a nefelometrie probíhá při 840 nm. Rozsah měření je 5 – 340 mg/l (vyšší koncentrace albuminu se ředí diluentem). Detekční limit je 5 mg/l albuminu. Preciznost v sérii 2,4 – 6,4 %, mezi sériemi 4,0 – 7,6 %; zpětný výtěžek 100,6 – 108,7 %. Při analýze ruší zakalený vzorek, nebo částice ve vzorku. Nevadí hemoglobin 1,15 g/l a bilirubin 68,4 µmol/l. Efekt nadbytku antigenu se neprojevuje do 12,7 g/l albuminu.

RIA je v kompetitivním uspořádání, kdy albumin značený ¹²⁵I soutěží o omezený počet vazebných míst specifické protilátky s albuminem z moči (inkubace 1 h za laboratorní teploty). Volný a vázaný podíl jsou separovány precipitací s druhou protilátkou s přídavkem etylenglykolu (akcelerátor precipitace) a následnou centrifugací (supernatant se odsaje). Signál precipitátu měřený gama-počítačem je nepřímo úměrný koncentraci albuminu. Sedmibodová kalibrace umožňuje rozsah měření 1,56 – 100 mg/l albuminu a 100 testů/4 h. Funkční senzitivita je 3 mg/l albuminu. Preciznost v sérii je 4 %, mezi sériemi 5,2 – 18,4 %.

ELISA používá kompetitivní inhibici. Kozí protilátka vůči lidskému albuminu je ukotvená v jamkách mikrotitračních destiček. Vzorky byly pipetovány současně s konjugátem albuminu a křenové peroxidázy; následně proběhla inkubace 30 min při laboratorní teplotě. Po odstranění volných reagencií promytím (5x) byl přidán tetrametylbenzidin s H₂O₂ a vybarvování bylo (po 15 min) zastaveno stop činidlem. Výsledná absorbance (měřena do 5 min) při 450/620 nm je nepřímo úměrná množství albuminu ve vzorku. Rozsah měření na základě pětibodové kalibrace je 0 – 50 mg/l (při vyšších koncentracích lze vzorek naředit nulovým kalibrátorem). Mez detekce je 0,24 mg/l. Přesnost v sérii je 3,8 – 11,7 %, mezi sériemi 4,9 – 8,5 %; zpětný výtěžek 97 – 122 %, linearita ředění 86,3 – 129,7 %. Hematurie ruší při analýze.

ELISA v sendvičovém uspořádání používá mikrotitrační destičky s jamkami potaženými králičí protilátkou vůči lidskému albuminu. Albumin z moče se váže na tuto primární protilátku (inkubace 90 min při 20 °C). Po promytí (3x) se na další vazebné místo albuminu váže druhá protilátka (kozí vůči lidskému albuminu) konjugovaná s peroxidázou (inkubace 60 min při 20 °C). Po promytí (3x) reaguje peroxidáza s o-fenylendiaminem a H₂O₂ (inkubace 20 min při 20 °C). Vzniklé zbarvení je úměrné koncentraci albuminu a měří se při 450 nm (nebo 493 nm). Rozsah měření je do 10 mg/l. Mez detekce je 0,016 mg/l albuminu. Přesnost v sérii je 5,1 – 9,2 %, mezi sériemi 9,6 – 16,2 %; zpětný výtěžek 92,3 – 116,5 %.

Intraindividuální variabilita 20 – 64 %, interindividuální variabilita 55 %.

Toleranční limit EHK:30 % při ≤ 30 mg/l albuminu a 21 % při > 30 mg/l albuminu.

Hodnoty snižuje: věk (albumin/kreatinin), vegetariánství, dieta s vysokým obsahem zbytků, opakované rozmrazování, absorpce na povrchy (plast, sklo).

Hodnoty zvyšuje: kouření (1,7x), vysoký krevní tlak, zvýšený glykovaný hemoglobin, alkohol, vzpřímená poloha (+ 10 %), tělesné cvičení (po maratonu až 10x), těhotenství (2. – 3. trimestr) a po porodu, stres, věk nad 90 let; léky: nebcin, netromycin.