|
Popis vyšetření: LIPÁZA
Zařezeno v kategoriích: Synonyma:
triacylglycerol acylhydrolasa, EC 3.1.1.3; Chemické názvosloví připouští u enzymů pouze koncovku –asa, progresivní pravopis a řada současných lékařských publikací uvádí koncovku –áza. V češtině se odvozený název EC triacylglycerol lipase vyskytuje zcela ojediněle v jakékoliv variantě (jedno slovo, resp. samostatný kmen; koncovka -áza či -asa), v anglickém názvosloví EC je kmenový základ (např. lipase, hydrolase) vždy samostatně. Mezinárodní zkratka PPL (Google 253 000) je označení pro prasečí pankreatickou lipázu, GEH = glycerolesterhydroláza se příliš nepoužívá (Google 4 690). Frekventovanější je označení LPS (Google 51 000), někdy se používá HPL = lidská pankreatická lipáza (Google 7 910). Preanalytická fáze:
Při stanovení v séru je stabilita: 7 dnů při 20 - 25 °C, 7 – 21 dnů při 4 - 8 °C, 1 rok při -20 °C. Poznámky k analytické metodě:
Zásadní poznatek pro pochopení metodologie stanovení lipázy je to, že enzym působí pouze na rozhraní mezi esterem a vodou. Tedy substrát musí být ve formě emulze. Reakční rychlost stoupá, je-li emulze více dispergována – tedy plocha rozhraní je větší. Neschopnost získat vhodné rozhraní mezi esterem a vodou umožňuje, aby se uplatnily jiné enzymy jako karboxylová ester hydroláza, arylester hydroláza a lipoproteinová lipáza. Jsou-li používány triacylglycerolové substráty s krátkými řetězci mastných kyselin, které jsou ve vodě rozpustné, mohou se také uplatnit výše uvedené enzymy jako falešná lipázová reakce. První titrační metody byly příliš zdlouhavé (24 h inkubace séra při 37 °C s 50 % emulzí olivového oleje a 5 % arabskou gumou ve fosfátovém pufru při pH 7,0; uvolněné mastné kyseliny byly titrovány 50 mmol/l NaOH na fenolftalein). Imunochemické metody stanovují lipázu buď kvantitativně (enzymová imunoanalýza) nebo semikvantitativně (latexová aglutinace), kdy je protilátka vázaná na latexové částice, které reagují se vzorkem. Enzymová kaskáda používá 1,2-diglycerid mastné kyseliny s dlouhým řetězcem, rozpouštějící micely, obsažený ve vaječném lecitinu. Lipáza štěpí tento substrát na 2-monoglycerid a mastnou kyselinu. Reakční směs je pufrována na pH 6,8 (N-morfolino)etansulfonovou kyselinou/N,N-bis(2-hydroxyetyl)-2-aminoetansulfonovou kyselinou. V dalším kroku je 2-monoglycerid hydrolyzován na glycerol specifickou 2-monoglycerid lipázou a je pufrována na pH 8,0 3-[tris(hydroxymetyl)metylaminopropan-sulfonovou kyselinou. V posledním kroku je chromogen (4-aminofenazon/N-etyl-N-[2-hydroxy-3-sulfopropyl-m-toluidin] [TOOS]) oxidován na fialové barvivo s maximem absorbance 550 nm. Reakční směs také obsahuje kolipázu, deoxycholát a vápenaté ionty. Postup má dobrou reprodukovatelnost a je snadno automatizovatelný. Reprodukovatelnost v sérii byla CV 0,29 – Vyčeření je postup při kterém se sleduje snížení zákalu emulze oleje s vodou při 340 nebo 400 nm v důsledku hydrolýzy triacylglycerolů lipázou. Tato technika vyžaduje vysoce stabilní a reprodukovatelně připravovaný substrát, který má vhodnou počáteční absorbanci. Vzorek se přidá k substrátu a kinetika vyčeření se měří turbidimetricky nebo nefelometricky. Kolipáza zvyšuje reakční rychlost a spolu s přídavkem žlučových kyselin zvyšuje spolehlivost analýzy. Metoda je rychlá a snadno automatizovatelná. Koncentrace substrátu je ovšem daleko pod úrovni konstanty Michaelise a Mentenové a proto nebyl tento postup navržen ke standardizaci. Vysoké hodnoty revmatoidního faktoru ruší stanovení. Mez detekce 0,09 µkat/l. Rozsah metody do 4,7 µkat/l. Reprodukovatelnost v sérii CV 9,3 – 10,9 %, mezi sériemi 13 – 14 %. Fluorimetrická detekce je založena na hydrolýze esteru kyseliny olejové se 4-metyl-umbeliferonem prostřednictvím lipázy. Uvolněný 4-metylumbeliferon se detekuje fluorimetrem. Reprodukovatelnost měření Nový typ techniky stanovení pankreatické lipázy je založen na změně vodivosti roztoku uvolněním mastných kyselin ze substrátu-trioleinu; detekce se provádí akustickým snímačem a měřenou veličinou je frekvenční odpověď. Intraindivuduální variace 14 %, interindividuální variace 17 %. Referenční metoda nebyla ustanovena. Toleranční limit EHK: 24 %. Významné interference:
Výsledky stanovení lipázy zvyšují: acetaminofen, albumin, betanechol, bilirubin, cerivastatin, deoxycholát, diazoxid, didanosin, dideoxyinosin, dipidolor, estropipat, etanol, felbamat, fentanyl, hemodialýza, heparin, hydrokortizon, chlorothiazid, cholinergika, kalcitriol, klozapin, kodein, kyselina valproová, meperidin, merkaptopurin, metacholin, metolazon, metronidazol, minocyklin, morfin, nitrofurantoin, orální kontraceptiva, pegaspargasa, pentazocin, peritoneální dialýza, prednisolon, sekretin, spasmoveralgin, sulfamethoxazol, aj. |