Popis vyšetření: SPECIFICKÝ TĚHOTENSKÝ beta1-GLYKOPROTEIN (SP1)

Zařezeno v kategoriích:

Synonyma:

Specifický těhotenský protein, SP1, PSG1, RHSP1 (Recombinant Human), pregnancy specific beta1-glycoprotein, transkripční faktor Sp1, TSFP1, specifity protein 1

Preanalytická fáze:

Stanovení se provádí v séru nebo plazmě (antikoagulans EDTA nebo heparin) nebo v supernatantu buněčných kultur. Maximální čas od získání do zpracování vzorku je 1 d při doporučené teplotě 4°C.Jinde se uvádí stabilita 1 d při 18 – 26 °C, 7 d při 4 – 8 °C a 12 týdnů při -20 °C, resp. 6 měsíců při -80 °C.

Poznámky k analytické metodě:

RIA má příliš velkou citlivost (rozsah 7 – 440 µg/l) a je příliš pomalá (kompetitivní imunoreakce s 125I-SP1 a králičí protilátkou 16 – 24 h, precipitační reakce s oslí protilátkou 0,5 – 4 h). Mez detekce metody je 2 µg/l.

ELISA je sendvičového typu. Protilátka vůči SP1 je zakotvena v jamkách mikrotitračních destiček. Přidá se standard nebo vzorek (pipetování ukončit do 10 min). Po inkubaci (37 °C, 1,5 h) a odsátí se přidá druhá protilátka vůči SP1 s biotinylovou kotvou. Po inkubaci (37 °C, 1h) a promytí (3x pufrem) následuje připojení křenové peroxidázy přes avidinový můstek (inkubace 37 °C, 30 min). Poté se jamky 5x promyjí a přidá se tetrametylbenzidin. Další inkubace je ve tmě (37 °C, 15 min) a pak se přidá stop činidlo. Detekce se provádí při 450 nm (možno i bichromaticky při 540 nebo 570 nm). Modrá barva roztoku se po okyselení mění na žlutou. Rozsah metody 1 – 400 mg/l. Detekční limit 1 mg/l. Preciznost v sérii < 8 %, mezi sériemi 10 %.

Významné interference:

Snížená hladina až o 50 % 24 – 50 h po porodu.

Zvýšená hladina v těhotenství (ve 40. týdnu až 20x).