Popis vyšetření: LDL-CHOLESTEROL

Zařezeno v kategoriích:

Synonyma:

LDLC, LDL-C, low-density lipoprotein cholesterol, β-lipoproteiny

Preanalytická fáze:

Odběr nalačno, vhodná doba lačnění je 12 – 14 hodin. Pokyny k preanalytické úpravě vzorku: urychleně centrifugovat a separovat.
Sérum, plazma (lze použít EDTA nebo heparin, ostatní protisrážlivá činidla mohou být příčinou chyb) – stabilita vzorku: 20 – 25 °C: 12 h, 4 – 8 °C: 10 dní, -20 °C: 12 týdnů.
Stanovení ovlivňuje věk, dieta, pohlaví, menstruační cykly a má významný intraindividuální rozptyl. Po akutním onemocnění, po infarktu myokardu, po hospitalizaci je vhodné dodržet odstup až 3 měsíců. Fyziologicky se koncentrace cholesterolu zvyšují během gravidity. Nízké koncentrace cholesterolu v séru (plazmě) mohou být důsledkem malnutrice, malabsorpce, hypertyreózy.

Poznámky k analytické metodě:

Heterogenní metody založené na srážení polyanionty (polyvinylsulfát, dextran sulfát) nejsou vždy dostatečně specifické a robustní pro oddělení VLDL obsahujících Apo B od LDL, obsahujících také apo B. Kromě toho tyto metody obvykle vycházejí ze stanovení VLDL + HDL po precipitaci LDL, takže LDL se měří pouze nepřímo.

Hlavním problémem stanovení zůstává nestejnoměrná reakce činidel s LDL, IDL, Lp(a) a Lp-X. Některé metody při stanovení široké frakce LDL zahrnou až 20 % VLDL nebo naopak nezahrnou až 30 % IDL a až 50 % LDL.

Imunoseparační metody izolují LDL od chylomikronů, VLDL a HDL pomocí filtračního systému obsahujícího protilátky proti apolipoproteinům AI a E na latexových kuličkách. Reprodukovatelnost v sérii CV 1,2 –3,8%, mezi sériemi 2,0 – 5,1 %, výtěžnost 96,4 – 97,8 %.

Homogenní analytické metody se separací pomocí detergentů dosahují CV 0,7 – 3,1 %, výtěžnost 87 – 105 %
a vychýlení 0,8 až -11,2 %.
První postup k uvolnění cholesterolu z lipoproteinů jiných než LDL použije polymerní detergent. Tento cholesterol reaguje s cholesterolesterázou, cholesteroloxidázou, peroxidázou a 4 aminoantipyrinem na bezbarvý produkt. Dalším činidlem je detergent uvolňující cholesterol z LDL. LDL-cholesterol reaguje se složkami prvního činidla a navíc s dvojsodnou solí N,N-bis(4-sulfobutyl)-m-toluidinu, která je obsažena
v druhém činidle; vzniká barevný produkt. Reprodukovatelnost v sérii CV 0,6 – 1,5 %, celkové CV 0,8 – 1,7 %. Vychýlení -2,6 až 0 %. Celková chyba 3,8 %.
Druhý postup používá emulgátor, který stabilizuje LDL molekuly, takže jejich cholesterol nereaguje. Ostatní lipoproteiny reagují s cholesterolesterázou, cholesteroloxidázou, katalázou a N-(2-hydroxy-3-sulfopropyl)-
3,5-dimethoxyanilinem a poskytují bezbarvé produkty. Druhé činidlo obsahuje detergent uvolňující cholesterol
z LDL a azid sodný k inhibici katalázy. LDL-cholesterol reaguje se složkami prvního činidla a peroxidázou
s 4-aminoantipyrinem z druhého činidla za vzniku barevného produktu. Reprodukovatelnost v sérii CV 0,5 –
1,1 %, celkové CV 1,0 – 1,4 %. Vychýlení -5,0 až -2,1 %. Celková chyba 5,9 %.
Třetí postup stabilizuje VLDL a chylomikrony cyklodextrin sulfátem, dextran sulfátem a hořečnatými komplexy. První činidlo ještě obsahuje peroxidázu a sodnou sůl N-(2-hydroxy-3-sulfopropyl)-3,5-dimethoxyanilinu. Druhé činidlo tvoří stabilní micely s HDL a již dříve stabilizovanými VLDL a chilomikrony, takže je inhibována jejich reakce s cholesterolesterázou a cholesteroloxidázou. LDL-cholesterol reaguje se složkami prvního činidla
a navíc s reagenciemi v druhém činidle: cholesterolesterázou, cholesteroloxidázou a 4 aminoantipyrinem, takže vzniká barevný produkt. Reprodukovatelnost v sérii CV 0,5 – 1,5 %, celkové CV 1,3 – 1,9 %. Vychýlení -3,4 až +8,9 %. Celková chyba 5,8 %.
Čtvrtý postup používá ke stabilizaci LDL molekul enzymový komplex. Cholesterol s ostatních lipoproteinů reaguje s cholesterolesterázou, cholesteroloxidázou, katalázou a N-(2-hydroxy-3-sulfopropyl)-
3,5-dimethoxyanilinem a poskytují bezbarvé produkty. Druhé činidlo obsahuje detergent uvolňující cholesterol
z LDL a azid sodný k inhibici katalázy. LDL-cholesterol reaguje se složkami prvního činidla a peroxidázou
s 4-aminoantipyrinem z druhého činidla za vzniku barevného produktu. Reprodukovatelnost v sérii CV 0,6 –
0,9 %, celkové CV 0,6 – 1,0 %. Vychýlení +9,6 až +18,0 %. Celková chyba 15,5 %.

Referenční metoda oficiálně neexistuje i když někdy bývá za ní považována centrifugace v analytické ultracentrifuze.

Toleranční limit EHK: 15 %.

Významné interference:

Koncentraci LDL-cholesterolu snižují: aferéza, bezlepková dieta, α-cyklodextrin, česnek, etanol, estradiol, hemodialýza, heparin, hladovění, IGF-I, interleukin 3, růstový hormon, rybí tuk, sacharidová dieta, separační gely, tučné jídlo, vlákniny, aj.
Koncentraci LDL-cholesterolu zvyšují: Intralipid, kouření, menopauza, nasycené mastné kyseliny, obezita, omega-3-mastné kyseliny, palmitová kyselina, stres, těhotenství (týden po porodu), transplantace ledviny, triacylglyceroly, aj.