GH, hGH, STH, růstový hormon;

growth hormon, human growth hormone, somatotrophin, somatotropic hormone, somatotrophic hormone, humatrope, protropin.

Stanovení se provádí ve srážlivé krvi bez přídavků. Bazální sekrece má pouze omezený význam, protože je secernován v pulzech. Vyžaduje hospitalizaci a odběry po 20 – 30 min v průběhu 12 nebo 24 h. Stanovení lze nahradit vyšetřením somatomedinu (IGF-I). Minima jsou na jaře. Diurnální maximum po 90 min hlubokého spánku, pokles ráno, mírné zvýšení v odpoledních hodinách (amplituda 300 – 400 %). V pozdní folikulární fázi jsou hodnoty dvojnásobné oproti časné a střední fázi. Diurnální rytmus je narušen u obézních. Stabilita v séru 1 d při 20 – 25 °C, 7 – 14 d při 4 °C, 2 – 3 měsíce při -20 °C.

Přepočet: 3 mU/l = 1 µg/l.

Fluorimetrie: Stanovení se provádělo ve fosfátovém pufru. Fluorescenční detektor měl nastavení excitace 275 nm a emise 335 nm. Rozsah měření 1,25 – 50 µg/l GH. Analytická senzitivita 0,025 µg/l, funkční senzitivita 0,075 µg/l GH. Preciznost v sérii byla 2,6 – 4,5 %, mezi sériemi 5,8 – 8,5 %.

RIA: GH je stanovován kompetitivním postupem, kdy vzorky a kalibrátory jsou inkubovány 16 – 24 h (15 – 30 °C) s ¹²⁵I-GH a králičí protilátkou vůči GH. Po inkubaci se přidá precipitační činidlo (oslí antisérum vůči králičímu séru zakotvené na polymeru s magnetickými částicemi), zamíchá se a inkubuje 10 min při 2 – 8 °C. Po magnetické separaci nebo centrifugaci se supernatant dekantuje, nechá odkapat a radioaktivita precipitátu se měří gama-počítačem (1 min). Signál je nepřímo úměrný koncentraci GH ve vzorku. Rozsah měření na základě sedmibodové kalibrace 0,16 – 10 ng/zkumavku (1,6 – 100 µg/l). Analytická citlivost je 0,16 ng na zkumavku. Preciznost v sérii je 3,0 %, mezi sériemi 8,3 – 12,8 %; zpětný výtěžek 87 – 91 %.

IRMA: GH je stanovován sendvičovým jednostupňovým postupem, kdy vzorky a kalibrátory jsou inkubovány (2 h za laboratorní teploty a třepání) se specifickou protilátkou vůči GH značenou ¹²⁵I a biotinylovanou protilátkou vůči GH ve zkumavkách potažených streptavidinem. Po promytí 3x se radioaktivita precipitátu se měří gama-počítačem (1 min). Signál je přímo úměrný koncentraci GH ve vzorku. Rozsah měření na základě šestibodové kalibrace 0,013 – 33,3 µg/l. Analytická citlivost je 0,013 µg/l. Efekt nadbytku antigenu nebyl pozorován do 1665 µg/l. Preciznost v sérii je 1,0 % – 3,5 %, mezi sériemi 2,0 – 17,9 %; zpětný výtěžek 92,2 – 104,4 %.

ELISA: Používají se jamky potažené králičí protilátkou vůči GH. Přidá se vzorek a biotinylovaná protilátka vůči GH. Směs se inkubuje 120 min za laboratorní teploty (třepání). Po promytí (5x) se přidá biotinylovaná protilátka vůči GH a inkubuje se 30 min za laboratorní teploty (třepání). Pak se přidá konjugát streptavidinu s POD. Směs se inkubuje 30 min za laboratorní teploty. Po promytí (5x) se přidá tetrametylbenzidin a inkubuje se 15 min za laboratorní teploty ve tmě. Pak se přidá stop činidlo (0,2 M H₂SO₄) a měří se do 30 min při 450/590-650 nm. Rozsah měření na základě šesti kalibrátorů do 0,05 – 1 µg/l (sérum se ředí 10x až 50x dilučním pufrem, takže se měří výsledky do 10 resp. 50 µg/l). Citlivost měření je 0,0115 µg/l GH. Preciznost v sérii je 3,7 – 8,0 %, mezi sériemi 3,1 – 6,0 %; zpětný výtěžek 80,4 – 106,7 %. Bilirubin 342 µmol/l a triacylglyceroly 22,6 mmol/l stanovení neruší. Heterofilní protilátky mohou ovlivnit výsledky.

DELFIA je heterogenní fluorescenční imunoanalýza, kde prodloužená fluorescence Eu³⁺ je zesílena speciálním roztokem, který uvolňuje Eu³⁺ do roztoku a současně tvoří jeho ochranný chelát. Na mikrotitračních destičkách je zakotvena myší monoklonální protilátka vůči GH. V sendvičovém uspořádání se pipetuje GH ze vzorku a myší monoklonální protilátka značená Eu³⁺. Po inkubaci (120 min, třepání) a promytí se přidá zesilovací roztok; reakční směs se třepe 5 min a celý postup probíhá za laboratorní teploty. Fluorescence (excitace 340 nm, emise 615 nm) je přímo úměrná koncentraci GH ve vzorku a měří se do 1 h. Analytická citlivost je 0,01 µg/l. Rozsah metody na základě šestibodové kalibrace 0,01 – 33,3 µg/l (vyšší koncentrace GH se ředí nulovým kalibrátorem). Bilirubin 342 µmol/l, hemoglobin 10 g/l a triacylglyceroly 11,3 mmol/l stanovení neruší. Celková preciznost 6 – 13 %. Heterofilní protilátky mohou ovlivnit výsledky.

CLIA je sendvičový zábleskový postup, kdy se GH ze vzorku naváží během inkubace na magnetické částice potažené myší monoklonální protilátkou vůči GH, přidají se myší monoklonální protilátky vůči GH značené izoluminolem a provede se inkubace. Celková doba inkubace je 31,5 min. Po promytí se přidá startér (0,12 % H₂O₂ + 4 % NaOH) a fotonásobičem se měří záblesk. Intenzita signálu je přímo úměrná koncentraci GH. Dvoubodová kalibrace se provede v tripletu pro rozsah měření GH 0,05 µg/l – 80 µg/l. Analytická citlivost je 0,009 µg/l, funkční citlivost 0,05 µg/l GH. Preciznost v sérii 1,6 – 4,4 %, mezi sériemi 2,1 – 13,5 %; linearita ředění 86,2 – 120,2 %. Efekt nadbytku antigenu nebyl pozorován do 7000 µg/l.Ani koncentrace hemoglobinu 10 g/l, triacylglycerolů 56,5 mmol/l a bilirubinu 342 µmol/l neruší.

Jiné stanovení je založeno na sendvičové imunochemické reakci se sledováním luminiscence zesílené enzymem. GH se v prostředí pufrovaného roztoku s obsahem sérových bílkovin váže na myší monoklonální protilátku vůči GH imobilizovanou na polystyrénové kuličce a současně se na druhé vazebné místo GH naváže polyklonální králičí protilátka vůči GH konjugovaná s alkalickou fosfatázou. Reakce probíhá 30 min při 37 °C. Po odstranění nezreagovaného materiálu odstředěním a promytí se přidá substrát adamantyldioxetanfenylfosfát, který hydrolyzuje stykem s alkalickou fosfatázou za vzniku nestabilního meziproduktu. Ten se rozpadá za vzniku záření, které se detekuje luminometrem. Intenzita záření 425 – 500 nm je přímo úměrná hladině GH ve vyšetřovaném vzorku. Výsledky jsou stanoveny podle kalibrační křivky, která je pro přístroj specifická a je určena na základě dvoubodové kalibrace (v kvadrupletu) a vzorové křivky získané z čárového kódu činidla. Rozsah kalibrace je do 40 µg/l, avšak do hodnoty 17000 µg/l nebyl pozorován efekt nadbytku antigenu. Analytická citlivost je 0,01 µg/l. Preciznost v sérii 2,9 – 4,6 %, celková 4,2 – 6,6 %; zpětný výtěžek 90 – 107 %, linearita ředění 87 – 104 %. Ani vysoké koncentrace hemoglobinu (5,12 g/l), bilirubinu (342 µmol/l) a triacylglycerolů (33,9 mmol/l) neruší. U stanovení využívajících protilátky existuje možnost interference heterofilních protilátek přítomných v pacientském vzorku.

Další postup používá podobný luminogen Lumi-Phos 530. Do zkumavky se pipetuje standard nebo vzorek obsahující GH a paramagnetické částice potažené myší monoklonální protilátkou vůči GH. Po inkubaci se separací v magnetickém poli a promytím odstraní nenavázané složky. Přidá se kozí polyklonální protilátka vůči GH značená ALP. Po inkubaci se separací v magnetickém poli a promytím odstraní nenavázané složky. Dále se přidá chemiluminiscenční substrát. Emitované světlo je přímo úměrné množství GH. Reagencie se musí skladovat při 2 – 10 °C. Rozsah měření při 470 nm na základě šestibodové kalibrace je 0,002 – 35 µg/l. (po ředění 2x nulovým kalibrátorem až do 70 µg/l). Analytická citlivost 0,002 µg/l. Preciznost v sérii je 2,1 – 11,3 %, celková 3,5 – 18,3 %. Zpětný výtěžek je 92 – 108 %, linearita ředění 93,7 – 115,2 %. Ani vysoké koncentrace hemoglobinu (10 g/l), bilirubinu (342 µmol/l) a triacylglycerolů (33,9 mmol/l) neruší. U stanovení využívajících protilátky existuje možnost interference heterofilních protilátek přítomných v pacientském vzorku.

Stanovení elektrochemiluminiscenční imunoanalýzou (ECLIA) v sendvičovém uspořádání trvá 18 min. Vzorek (40 µl) je inkubován s biotinylovanou monoklonální myší protilátkou vůči GH a monoklonální myší protilátkou vůči GH značená ruthéniovým komplexem. Pak se přidají paramagnetické mikročástice potažené streptavidinem, na který se naváže imunokomplex svou biotinylovou kotvou. Reakční směs se nasaje do měřící komůrky, kde se mikročástice zachytí magneticky na povrchu elektrody. Nenavázané látky se odstraní pomocí tripropylaminového činidla. Zavedení napětí na elektrodu vyvolá chemiluminiscenci, která se měří fotonásobičem při 620 nm. Výsledky jsou stanoveny na základě kalibrační křivky, která je pro přístroj specifická a je určena na základě dvoubodové kalibrace a vzorové křivky získané z čárového kódu činidla. Luminiscence je přímo úměrná hladině GH ve vzorku. Metoda je použitelná v rozsahu 0,03 – 50 µg/l (vyšší koncentrace lze ředit univerzálním diluentem 3x). Analytická citlivost (2 SD nulového kalibrátoru) je 0,03 µg/l, funkční citlivost 0,05 µg/l. Preciznost v sérii 1,3 – 2,5 %, mezi sériemi 2,3 – 3,4 %. Pacienti léčeni vysokými dávkami biotinu (tj. > 5 mg/den) by se neměli odebírat dříve než po 8 h od posledního podání biotinu. Efekt nadbytku antigenu nebyl pozorován do 2000 µg/l. RF (< 600 kU/l) neruší.  Reagencie nutno skladovat při 2 – 8 °C. Ani vysoké koncentrace hemoglobinu (5 g/l), bilirubinu (428 µmol/l) a triacylglycerolů (17 mmol/l) neruší.  Ve vzácných případech je možné pozorovat interferenci způsobenou velmi vysokým titrem protilátek vůči streptavidinu nebo rutheniu.

HPLC: používá reverzní fázi C18, kolona 250x4,6 mm (velikost zrna 5 µm) a mobilní fázi vodný roztok 0,1 % H₃PO₄ (průtok 0,5 ml/min), teplota 55 °C, UV detektor 220 nm. Eluční čas GH byl 4,7 min. Rozsah měření 10 – 75 µg/l GH. Analytická senzitivita 2,5 µg/l, funkční senzitivita 7,5 µg/l GH. Preciznost v sérii 1,6 – 2,3 %, mezi sériemi byla 3,6 – 6,0 %.

Jiný postup používal kolonu 50x4,6 mm (velikost zrna 5 µm) a mobilní fázi v gradientu 30 min, kdy se postupně v pufru TRIS-HCl 20 mmol/l zvyšoval podíl stejného pufru s 0,5 mol/l NaCl z 5 na 70 % při průtoku 0,5 ml/min a teplotě kolony 25 °C. Detekce probíhala při 210 nm.

IDMS postup pracuje pouze s fragmenty aminokyselin 42-64 a 128-136 po proteolýze, takže je diskutabilní, zda se jedná o stanovení GH nebo určitých konfigurací peptidů.

Mezinárodní standard: WHO International Standard Somatrophin (Recombinant DNA-Derived Human Growth Hormone), NIBSC code: 98/574, Version 4.0, 14/01/2008.

Toleranční limit EHK: 26 %.

Hodnoty snižuje: dieta (nižší po jídle), postprandiální hyperglykémie (za 3h), zvýšení volných mastných kyselin, hypotermie, obezita, stáří, menopauza, těhotenství, REM spánek, bdění, probuzení, dlouhodobé zvýšení kortikoidů; léky: beclomet, becotide, fenolamin, fenotiaziny, hydrokortizon, IGF-I, izoproterenol, kortikoidy, metylsergid, progesteron, somatostatin (lanreotid, oktreotid), yohimbin.

Hodnoty zvyšuje: alkoholismus, hladovění (2 – 5 d), deplece bílkovin, hypoglykémie, malnutrice, arginin, expozice teplu, stres, spánek, tělesné cvičení, menstruace, kouření, redukce hmotnosti; léky: arginin, bromokriptin, cerucal, estrogeny, glukagon, glukóza, haemiton, inderal, infúze kaliem, inzulin, klonidin, levodopa, noradrenalin, nutramin, propranolol, pyridostigmin, testosteron, tensamin.