18-aldokortikosteron, 18-oxokortikosteron; D-aldosterone;

11β,21-dihydroxy-3,20-dioxo-4-pregnen-18-al; 11β,21-dihydroxypregn-4-en-3,18,20-trion;18-formyl-11β,21-dihydroxy-4-pregnen-3,20-dion;

11-hydroxy-17-(2-hydroxyacetyl)-10-metyl-3-oxo-1,2,6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-tetradekahydrocyklopenta[a]fenantren-13-karbaldehyd;

Reichstein X,Aldocortin, Aldocorten, Electrocortin, Elektrocortin;

Stanovení se provádí v séru nebo plazmě (antikoagulans EDTA, heparin), výjimečně v moči. Odběr do plastových nebo skleněných zkumavek. Dieta 2 – 4 týdny před odběrem s normálním příjmem sodných a draselných iontů. Neměnit odběrovou polohu (vleže, vsedě, ve stoje) alespoň 2 h před odběrem. 8 dnů před odběrem vynechat interferující léky (kromě α-blokátorů a ACE inhibitorů). Separaci plazmy (séra) provést do 30 min po odběru. Opakované rozmrazování vede k mírnému poklesu koncentrace (10x o 6,2 %). Plazma je stabilní, 4 d při 20 – 25 °C anebo 4 °C (pokles 13 %). Stabilita séra 4 h při 20 – 25 °C, 7 d při 4 – 8 °C, 1 měsíc při -20 °C. Moč je stabilní 2 h při 20 – 25 °C, 7 d při 4 – 8 °C po přidání konzervační látky (kyselina boritá, octová nebo chlorovodíková), 1 měsíc při -20 °C.

RIA Uplatňuje se kompetitivní postup, kdy vzorky a kalibrátory jsou inkubovány 3 h (třepání) za laboratorní teploty s ¹²⁵I-aldosteronem ve zkumavkách potažených králičí protilátkou vůči aldosteronu. Po inkubaci se obsah zkumavek vylije, nechá odkapat a radioaktivita precipitátu se měří gama-počítačem (1 min). Signál je nepřímo úměrný koncentraci aldosteronu ve vzorku. Rozsah měření na základě sedmibodové kalibrace 21,2 – 4432 pmol/l. (Vzorky moče se ředí 30x nulovým kalibrátorem a výsledky se násobí dilučním faktorem). Koncentrace > 110 pmol/l se ředí nulovým standardem a znovu měří. Analytická citlivost je 21,2 pmol/l. Preciznost v sérii je 3,3 – 4,5 % (sérum), 6,4 – 10,0 % (moč); mezi sériemi 5,9 – 9,8 % (sérum), 6,6 – 13,2 % (moč); zpětný výtěžek 88 – 116 % (sérum), 92 – 139 % (moč); linearita ředění 89 – 111 % (sérum), 85 – 142 % (moč). Křížová reakce: kortikosteron 0,02 %. Silná hemolýza a lipémie ruší. Heterofilní protilátky mohou interferovat při stanovení. V některých soupravách předchází imunoreakci úprava vzorku: hydrolýza (3,2 M HCl 24 h za laboratorní teploty ve tmě), extrakce do etylacetátu (60 min), odpaření (37 °C) etylacetátové vrstvy v proudu dusíku, rozpuštění odparku v nulovém kalibrátoru.

ELISA na mikrotitračních destičkách je kompetitivní postup, který používá zakotvenou králičí protilátku vůči aldosteronu a do jamek se přidává vzorek (moč je ředěná 50x) nebo kalibrátor a aldosteron značený POD. Po inkubaci (1 h, třepání) a promytí 3x se přidá tetrametylbenzidin s H₂O₂ v dimetylsulfoxidovém pufru. Roztok se inkubuje 15 – 20 min (třepání), pak se pipetuje stop činidlo (1 M H₂SO₄). Absorbance při 450 nm se měří do 20 min a je nepřímo úměrná koncentraci aldosteronu ve vzorku (při vysokých absorbancích lze použít 405 nebo 415 nm).  Celý postup probíhá za laboratorní teploty. Na základě šestibodové kalibrace je rozsah metody 27,7 – 2770 pmol/l (při vyšších koncentracích se ředí nulovým kalibrátorem; výsledky stanovení moče se násobí 50x). Analytická citlivost je 27,7 pmol/l. Preciznost v sérii je 4,1 – 10,4 %, mezi sériemi 9,4 – 9,7 %; linearita ředění 81,7 – 109,5 %, zpětný výtěžek 91,3 – 123,7 %. Křížová reaktivita: 11-deoxykortikosteron 1,1 %. Silná hemolýza, lipémie a ikterus ruší stanovení.

ELISA může používat pro kompetici také aldosteron značený ALP. Před imunoanalýzou se sérum nebo plazma chromatografují na koloně C₁₈ metanolem a eluují dietyléterem; odparek se rehydratuje v pufru TRIS. Moč se předem hydrolyzuje 0,2 M HCl. Na mikrotitračních destičkách je zakotvena oslí protilátka vůči ovčímu IgG a do jamek se přidává vzorek nebo kalibrátor, aldosteron značený ALP a ovčí polyklonální protilátka vůči aldosteronu. Po inkubaci (4 °C, 16 – 24 h) a promytí 3x se přidá 4-nitrofenylfosfát. Roztok se inkubuje 1 h za laboratorní teploty, pak se pipetuje stop činidlo (roztok Na₃PO₄). Absorbance při 405 nm se měří do 20 min a je nepřímo úměrná koncentraci aldosteronu ve vzorku (při vysokých absorbancích lze použít 405 nebo 415 nm). Na základě osmibodové kalibrace je rozsah metody 10,8 – 692 pmol/l (při vyšších koncentracích se ředí nulovým kalibrátorem). Analytická citlivost je 13 pmol/l. Preciznost v sérii je 4,4 – 6,6 %, mezi sériemi 10,8 – 16,3 %; linearita ředění 93 – 107 %, zpětný výtěžek 88,1 – 124,2 %. Křížová reaktivita: 11-deoxykortikosteron 0,3 %, ostatní ≤ 0,2 %.

Chemiluminiscenční analýza využívá kompetitivní princip, kdy aldosteron ze vzorku a aldosteron značený křenovou peroxidázou (přesněji biotinylovaný aldosteron + avidin-POD) soutěží 1 h (třepání) o vazebná místa polyklonální králičí protilátky, kterou jsou potaženy jamky mikrotitrační destičky. Vzorky moče vyžadují hydrolýzu (3,2 M HCl), neutralizaci (3,2 M NaOH) a následné ředění 50x (celkově 60x). Po promytí 6x se přidá substrát (luminol + H₂O₂) a sleduje se luminiscence (mezi 5. a 20. min), která je nepřímo úměrná koncentraci aldosteronu ve vzorku. Celý postup probíhá za laboratorní teploty. Šestibodová kalibrace umožňuje měření v rozsahu 11,7 – 5540 pmol/l. Vzorky s koncentrací aldosteronu v séru > 5540 pmol/l se ředí 8x. Naměřené koncentrace v moči se násobí 60x (Pokud ještě před násobením přesáhnou nejvyšší kalibrátor, tak se upravená moč ještě ředí 2x a naměřená hodnota se násobí 120x). Analytická citlivost je 11,7 pmol/l. Preciznost v sérii 4,7 – 5,5 %, preciznost mezi sériemi 6,6 – 8,1 %, zpětný výtěžek 86,9 – 113,2 %, linearita ředění 90,2 – 120,1 %. Křížová reakce: 11-deoxykortikosteron 1,1 %. Silná hemolýza, ikterus a lipémie ruší.

LC-MS-MS Vzorek se separován při 40 °C na koloně C₁₈ v gradientu metanol-voda s příměsí octanu amonného. Hmotnostní spektrometrie používá trojitý kvadrupól s elektrosprejem v negativním uspořádání. K dispozici je monitor, který sleduje dva více reakční přechody pro aldosteron a jeden více reakční přechod pro d₇-aldosteron. Rozsah měření je 2,7 – 2770 pmol/l. Preciznost je 0,5 – 9,1 %, zpětný výtěžek 89 – 118 %.

Referenční metoda LC-MS-MS z roku 1997: začíná extrakcí do směsi dichlormetanu a dietyléteru s přídavkem vnitřního standardu (flumethason, tj. hydrokortizon-17α-butyrát). Chromatografie se provádí na fenylované koloně s mobilní fází metanol-mravenčan amonný. Hmotnostní spektrometr používá elektrosprej v negativní uspořádání a sleduje se přechod m/z 359,2 → 331,2 pro aldosteron a 455 → 379 pro vnitřní standard. Rozsah měření je 41,5 – 1385 pmol/l. Analytická citlivost 27,7 pmol/l, funkční citlivost 41,5 pmol/l. Preciznost je 9,5 – 18,5 %, zpětný výtěžek 84 – 91,3 %.

Mezinárodní standard není k dispozici, i když čistý hormon lze zakoupit.

Toleranční limit EHK: 26 %.

Snížené hodnoty v séru: defekt 17-hydroxylázy, diabetes mellitus, hypernatrémie, hypokalémie, věk > 60 let, snížení hmotnosti při obezitě, dieta s vysokým obsahem sodných iontů, lékořice; poloha vleže 1/6 hodnoty polohy ve stoje; léky: aminoglutethimid, antihypertenziva, antacida, antirevmatika, infuze ANP nebo BNP, cisplatina, deoxykortikosteron, dexametazon, infuze dopaminu, enalapril, heparin, indometacin, inhibitory ACE (angiotensin-konvertázy), kaptopril, nesteroidní protizánětlivé látky, melatonin, prazosin, propranolol, ranitidin, saralazin, somatostatin, vasopresin.

Snížené hodnoty v moči: diabetes mellitus, akutní intoxikace alkoholem, lékořice; léky: deoxykortikosteron, fludrokortizon, glukokortikoidy, heparin, klonidin, labetalol, metyrapon, propranolol, timolol, Trimecryton, Trimepranol.

Zvýšené hodnoty v séru: alkohol, cirhóza jater, edémy (ledviny, játra, srdce), expozice CO, hyperkalémie, maligní hypertenze, hyponatrémie, kouření, selhávání srdce, namáhavé cvičení, dehydratace, hladovění, obezita, stres, těhotenství, změna polohy; léky: ACTH, amilorid, angiotensin, antihypertenziva, diazoxid, diuretika, estrogeny, furosemid, gentamicin, hydralazin, chlortalidon, kapreomycin, laxativa, lysofosfatidylcholin, viomycin, Aqua carminativa, Beclomet, Cerucal, Confinar, KCl, Nutramin, Urandil, Verospiron.

Zvýšené hodnoty v moči: hypertenze, edémy, hladovění, těhotenství, cvičení; léky: ACTH, angiotensin, diuretika tiazidová, furosemid, hydrochlorotiazid, hydrokortizon, kortikosteron, kortizon, kyselina etakrynová, laxativa, lithium, perorální kontraceptiva, progesteron, spironolakton, testosteron, triamteren.