Larvální toxokaróza – IgG protilátky; anti-Toxocara canis IgG

Odebírá se venózní srážlivá krev ráno nalačno. Je třeba vyloučit chylozitu a hemolýzu (ale v soupravě se uvádí, že to nevadí!). Stabilita séra při laboratorní teplotě 2 d, při 4 – 8 °C 14 d, při -20 °C 1 rok. Opakované rozmrazení se nedoporučuje.

Mikrotitrační destička je potažena syntetickými antigeny Toxocara canis, které jsou schopné vázat odpovídající protilátky ze vzorku. Kontroly nebo ředěné vzorky se napipetují, destička se zakryje fólií a inkubuje při 37 °C 1 h. Jamky se pak promyjí 3x, aby se odstranil nenavázaný materiál, a přidá se křenová peroxidáza konjugovaná s proteinem A. Následuje inkubace 30 min za laboratorní teploty. Konjugát se váže na zachycené specifické protilátky vůči Toxocara canis. Jamky se pak promyjí 3x, aby se odstranil nenavázaný materiál. Vzniklý imunokomplex se prokazuje přidáním tetrametylbenzidinu, který poskytuje modrý produkt. Reakce probíhá za laboratorní teploty 15 min ve tmě. Intenzita zbarvení je přímo úměrná množství protilátek vůči Toxocara canis ve vzorku. Přidáním ředěné kyseliny sírové (0,2 mol/l) se reakce zastaví a absorbance žlutého zbarvení se měří při 450/620 nm vertikální fotometrií do 30 min. Analýzou cut-off kontroly v dubletu se stanoví cut-off absorbance. Vzorky, které mají absorbanci o 10 % vyšší, jsou pozitivní. Vzorky, které mají absorbanci o 10 % nižší, jsou negativní a mezitím je šedá zóna. Diagnostická specifita i senzitivita testu je > 95 %. Průkaz neruší hemoglobin 10 g/l, bilirubin 342 µmol/l a triacylglyceroly 5,65 mmol/l.

Nelze vyloučit křížovou reakci u protilátek vůči Ascaris lumbricoides (dětské škrkavce) a Schistosoma (krevničce).