porphyrins

Vzorek moče je třeba uchovávat v temnu (alobal) při pH 6 – 7 (NaHCO₃), stabilita 4 – 7 d při 4 – 8 °C, 14 – 28 d při -20°C. Jiné prameny uvádí stabilitu 4 – 30 d při 15 – 25 °C a pH 6 – 7. U akutních stavů se vyšetřuje čerstvá moč. Při vyšetření sbírané moči vyloučit po tři dny rostlinnou stravu.

Odebranou stolici chránit před světlem a uchovávat v chladničce. Stabilita 3 d při 4 °C, 30 d při -20 °C. Po tři dny zachovat dietu k vyloučení krve ve stolici.

Stanovení HPLC v moči: Provádí se u vzorku, ve kterém byly stanoveny celkové porfyriny nad 200 mg/d. Na koloně C18 150x3,3 mm s velikostí zrna 5 µm se používají dvě mobilní fáze: voda (s příměsí 2,6-lutidinu a H₃PO₄) + acetonitril + aceton a acetonitril + metanol + aceton v gradientovém uspořádání při 30 °C a průtoku 0,8 ml/min. Nastřikuje se vzorek moče okyselený HCl (opakovatelnost nástřiku je 0,93 %). Doba analýzy je 25 min. Porfyriny se prokazují fluorimetrickou detekcí (excitace 400 nm, emise 625 nm). Jako standard se používá komerční souprava porfyrinových produktů. Výsledek se udává v % zastoupení jednotlivých frakcí.

K dispozici je také komerční souprava umožňující v moči stanovení v rozsahu porfyrinu do 1000 µg/l a to: uroporfyrinu (detekční limit 0,60 µg/l), 7-karboxyporfyrinu (detekční limit 0,55 µg/l), 6-karboxyporfyrinu (detekční limit 0,49 µg/l), 5-karboxyporfyrinu (detekční limit 0,51 µg/l), koproporfyrinu I (detekční limit 0,51 µg/l) a koproporfyrinu III (detekční limit 0,50 µg/l). Preciznost v sérii je 2,5 – 5,6 %, mezi sériemi 4,7 – 7,5 %.

Stanovení HPLC ve stolici: Provádí se u vzorku, ve kterém byly stanoveny celkové porfyriny nad 200 mmol/kg sušiny. Porfyriny se extrahují ze vzorku nesušené stolice esterifikační směsí. Nativní stolice se přelije esterifikační směsí (5 % H₂SO₄ v metanolu), homogenizuje a nechá se esterifikovat přes noc při laboratorní teplotě. Po centrifugaci se supernatant opatrně dekantuje do dělící nádoby a sediment se opět smíchá s esterifikační směsí. Supernatant se přidá k prvnímu podílu v dělící nádobě. Do dělící nádoby se přidá nasycený roztok octanu sodného a pak při pH > 3,5 vypadávají krystaly Na₂SO₄. Nakonec se přidá destilovaná voda a Na₂SO₄ se úplně rozpustí. Estery porfyrinů se po neutralizaci kyseliny sírové a zředění vodou extrahují chloroformem, chloroformová vrstva se 2x promyje vodou, zfiltruje a odpaří. Směs esterů se pak rozdělí adsorpční chromatografií na silikagelu se zakotvenými aminoskupinami a prokazuje fluorimetrickou detekcí (excitace 400 nm, emise 625 nm). Chromatografie je opět v gradientovém uspořádání, jenže mobilní fáze obsahuje pouze dvě rozpouštědla – etylacetát a heptan. Při průtoku 1,5 ml/min a 30 °C na koloně trvá analýza 30 min (opakovatelnost nástřiku je 0,57 %). Jako standard se používá komerční souprava porfyrinových produktů. Výsledek se udává v % zastoupení jednotlivých frakcí.   

Snížené hodnoty v moči a stolici: stání na světle při laboratorní teplotě.

Zvýšené hodnoty v moči: hemoglobin, menstruace, těhotenství, hemolytická anémie, cirhóza jater, obstrukční ikterus, Hodginova nemoc, pelagra; léky: aminofenazon, barbituráty, biseptol, dapson, deriváty pyrazolonu, estrogeny, etanol, fenazopyridin, fenylbutazon, fenylhydrazin, glutetimid, griseofulvin, hypnotika, chloralhydrát, chlorochin, chlorpropamid, karbamazepin, kyselina aminosalicylová, meprobamat, metyldopa, morfin, noxyron, pentazocin, perorální antikoncepce, progesteron, prokain, pyrazinamid, rhytmochin II, septrin, sulfonamidy, sulfonylurea, sumetrolim, supristol, tetracyklin, tolbutamid.

Zvýšené hodnoty ve stolici: hemolytická anémie, choroby jater, intoxikace olovem.