meningoencephalitis antibodies, tick-borne encephalitis antibodies

Vzorky séra nebo plazmy (antikoagulans citrát) jsou stabilní při 2 – 8 °C 5 d; pro delší skladování nutno zamrazit na -20 nebo -80 °C. Opakované rozmrazování se nedoporučuje.

Hemaglutinační inhibice, fixace komplementu a imunofluorescence se považují za historické metody. K dispozici jsou kvalitativní i kvantitativní metody ELISA.

ELISA Ig total používá mikrotitrační destičky se zakotveným antigenem klíš
eové encefalitidy. Do jamek se pipetují standardy nebo ředěné vzorky a myší monoklonální IgG protilátka vůči viru klíš
eové encefalitidy. Reaktanty se inkubují 1 h při 37 °C (lidské IgG a IgM protilátky vůči viru soutěží o jeho vazebná místa s myší monoklonální IgG protilátkou vůči viru klíš
eové encefalitidy). Jamky se 4x vymyjí (promývací pufr se ponechá v jamce > 5 s a po odsátí se destička vyklepne na filtrační papír). Přidá se konjugát anti-IgG s křenovou peroxidázou. Destička se inkubuje 60 min při 37 °C. Jamky se 4x vymyjí (promývací pufr se ponechá v jamce > 5 s a po odsátí se destička vyklepne na filtrační papír). Přidá se tetrametylbenzidin a inkubuje se 15 min za laboratorní teploty. Přidá se stop činidlo (ředěná kyselina sírová) a měří se absorbance při 450 nm. Signál je nepřímo úměrný množství IgG+IgM protilátek vůči klíš
eové encefalitidě. Relativní specifita > 95,7 %, relativní senzitivita > 95,7 %.

ELISA IgG používá mikrotitrační destičky se zakotveným antigenem klíš
eové encefalitidy. Do jamek se pipetují standardy nebo ředěné vzorky a inkubují 1 h při 37 °C (naváže se protilátka vůči viru). Jamky se 3x vymyjí (promývací pufr se ponechá v jamce > 5 s a po odsátí se destička vyklepne na filtrační papír). Přidá se konjugát anti-IgG s křenovou peroxidázou. Destička se inkubuje 30 min za laboratorní teploty ve tmě. Jamky se 3x vymyjí (promývací pufr se ponechá v jamce > 5 s a po odsátí se destička vyklepne na filtrační papír). Přidá se tetrametylbenzidin a opět se inkubuje 15 min za laboratorní teploty ve tmě. Přidá se stop činidlo a do 30 min se měří absorbance při 450/620 nm. Signál je přímo úměrný množství IgG protilátek vůči klíš
eové encefalitidě. Jestliže je koncentrace protilátek příliš vysoká a dochází k precipitaci chromogenu, doporučuje se ředění vzorku 100x. Kalibrační křivka s pěti standardy je do 300 kU/l. To umožňuje kvantitativní hodnocení. Pro kvalitativní hodnocení jsou koncentrace < 55 kU/l považovány za negativní, 55 – 110 kU/l jako neprůkazné (vyšetření je třeba za 2 – 4 týdny zopakovat) a > 110 kU/l za pozitivní. Preciznost v sérii je 4,2 – 6,8 %, mezi sériemi 6,7 – 8,3 %. Relativní specifita > 98 %, relativní senzitivita > 98 %. Při analýze neinterferují hemoglobin 10 g/l, triacylglyceroly 5,65 mmol/l, bilirubin 342 µmol/l.

ELISA IgM používá mikrotitrační destičky se zakotveným antigenem klíš
eové encefalitidy. Do jamek se pipetují standardy nebo ředěné vzorky a inkubují 1 h při 37 °C (naváže se protilátka vůči viru). Jamky se 3x vymyjí (promývací pufr se ponechá v jamce > 5 s a po odsátí se destička vyklepne na filtrační papír). Přidá se konjugát anti-IgM s křenovou peroxidázou. Destička se inkubuje 30 min za laboratorní teploty ve tmě. Jamky se 3x vymyjí (promývací pufr se ponechá v jamce > 5 s a po odsátí se destička vyklepne na filtrační papír). Přidá se tetrametylbenzidin a opět se inkubuje 15 min za laboratorní teploty ve tmě. Přidá se stop činidlo a do 30 min se měří absorbance při 450/620 nm. Signál je přímo úměrný množství IgG protilátek vůči klíš
eové encefalitidě. Jestliže je koncentrace protilátek příliš vysoká a dochází k precipitaci chromogenu, doporučuje se ředění vzorku 100x. Kalibrace se provádí pomocí cutoff kalibrátoru v dubletu. To umožňuje jen kvalitativní hodnocení. Koncentrace < cutoff – 10 % jsou považovány za negativní, cutoff ± 10 % jako neprůkazné (vyšetření je třeba zopakovat s čerstvým vzorkem, když je opět ve stejném intervalu, je výsledek považován za negativní) a > cutoff + 10 % za pozitivní. Preciznost v sérii je 7,5 %, mezi sériemi 8,9 %. Relativní specifita > 95 %, relativní senzitivita > 80 %. Při analýze neinterferují hemoglobin 10 g/l, triacylglyceroly 5,65 mmol/l, bilirubin 342 µmol/l.

V dostupné literatuře nejsou uvedené.