ECHO Abs

Odebírá se venosní srážlivá krev ráno nalačno. Lze použít také plazmu (antikoagulans EDTA, heparin, citrát). Odběr se provádí v akutním stádiu a pak za 3 – 4 týdny. Stabilita v séru při laboratorní teplotě 2 d, při 4 – 8 °C 14 d, při -20 °C 1 rok.

Komplement fixační test je reakce ECHO antigenu soupravy s protilátkou ze vzorku, která je prokazována fixací (spotřebou) komplementu. Indikací fixace je hemolýza. Hemolytický systém tvoří ovčí erytrocyty a protilátky vůči ovčím erytrocytům (amboreceptory). Jestliže neprobíhá reakce mezi antigenem a protilátkou, protože se ECHO protilátky v séru pacienta nenacházejí, komplement se nespotřebuje a je dostupný pro indikační reakci. Reakce antigenu s protilátkou indikačního systému vede k lýze ovčích erytrocytů (hemolýze) působením komplementu. Imunoreakce probíhá v mikrotitračních destičkách při 2 – 8 °C 15 – 24 h. Pak se přidá hemolytický systém a inkubuje se 15 – 30 min při 37 °C. Výsledky se odečítají vizuálně. Tento semikvantitativní postup nerozlišuje mezi ECHO IgG , ECHO IgA a ECHO IgM.

ELISA IgG (Echovirus) v sendvičovém uspořádání se provádí v mikrotitračních destičkách se zakotveným antigenem Echoviru. Kalibrátory nebo ředěné vzorky se pipetují do jamek, pak se roztoky 60 min inkubují při 37 °C. Obsah jamek se vyprázdní a jamky se 4x vypláchnou promývacím roztokem. Přidá se kozí polyklonální protilátka vůči lidskému IgG značená ALP, roztok se inkubuje 30 min při 37 °C a opět se jamky 4x vypláchnou promývacím roztokem; přidá se substrát p-nitrofenylfosfát a následuje další inkubace 30 min při 37 °C. Další krok je přidání stop činidla (1,2 M NaOH) a následuje měření při 405 nm (proti 620 – 690 nm), které nutno provést do 60 min. Signál je přímo úměrný množství stanovované protilátky. Jednobodová kalibrace (dubletu) je nastavena pomocí firemní čtyřparametrové logistik-log křivky. Výsledky se uvádí v kU/l. Variace při měření vertikální absorbance (optické hustoty) < 20 %.

ELISA IgA (Echovirus) v sendvičovém uspořádání se provádí v mikrotitračních destičkách se zakotveným antigenem Echoviru. Kalibrátory nebo ředěné vzorky se pipetují do jamek, pak se roztoky 60 min inkubují při 37 °C. Obsah jamek se vyprázdní a jamky se 4x vypláchnou promývacím roztokem. Přidá se kozí polyklonální protilátka vůči lidskému IgA značená ALP, roztok se inkubuje 30 min při 37 °C a opět se jamky 4x vypláchnou promývacím roztokem; přidá se substrát p-nitrofenylfosfát a následuje další inkubace 30 min při 37 °C. Další krok je přidání stop činidla (1,2 M NaOH) a následuje měření při 405 nm (proti 620 – 690 nm), které nutno provést do 60 min. Signál je přímo úměrný množství stanovované protilátky. Jednobodová kalibrace (dubletu) je nastavena pomocí firemní čtyřparametrové logistik-log křivky. Výsledky se uvádí v kU/l. Variace při měření vertikální absorbance (optické hustoty) < 20 %.

ELISA IgM (Echovirus) v sendvičovém uspořádání se provádí v mikrotitračních destičkách se zakotveným antigenem Echoviru. Kalibrátory nebo ředěné vzorky se pipetují do jamek, pak se roztoky 60 min inkubují při 37 °C. Obsah jamek se vyprázdní a jamky se 4x vypláchnou promývacím roztokem. Přidá se kozí polyklonální protilátka vůči lidskému IgM značená ALP, roztok se inkubuje 30 min při 37 °C a opět se jamky 4x vypláchnou promývacím roztokem; přidá se substrát p-nitrofenylfosfát a následuje další inkubace 30 min při 37 °C. Další krok je přidání stop činidla (1,2 M NaOH) a následuje měření při 405 nm (proti 620 – 690 nm), které nutno provést do 60 min. Signál je přímo úměrný množství stanovované protilátky. Jednobodová kalibrace (dubletu) je nastavena pomocí firemní čtyřparametrové logistik-log křivky. Výsledky se uvádí v kU/l. Variace při měření vertikální absorbance (optické hustoty) < 20 %. Přítomnost RF může vést k falešně pozitivním výsledkům.

V dostupné literatuře nejsou uvedeny