Popis vyšetření: TRYPSINOVÝ INHIBITOR asociovaný s tumorem (TATI)

Zařezeno v kategoriích:

Synonyma:

tumour-associated trypsin inhibitor, pancreatic secretory trypsin inhibitor, serine protease inhibitor, serine protease inhibitor Kazal-type 1, Kazal type 1, PCTT, PSTI, Spink3, TCP

 

Preanalytická fáze:

Stanovení se provádí v séru nebo plazmě (antikoagulans EDTA nebo heparin), případně v moči (jednorázově nebo sběr za 24 h). Analyt je stabilní v séru i moči 48 h při 4 °C a dlouhodobě při -20 °C. Opakované rozmrazení se nedoporučuje.

Poznámky k analytické metodě:

IRMA používá protilátku vůči TATI vázanou na pevnou fázi, na kterou se váže TATI ze vzorku a pak na něj druhá protilátka vůči TATI značená 125I. Imunoradiometrické stanovení TATI probíhá ve dvou krocích. Nejprve se ve zkumavkách potažených první protilátkou inkubují vzorky nebo kalibrátory. Po inkubaci se obsah zkumavek odsaje a přidá se do nich druhá protilátka značená 125I. Po druhé inkubaci se odsaje obsah zkumavek a vymyje se nenavázaná značená protilátka. Vázaná aktivita 125I se měří na gama-počítači 1 min. Koncentrace TATI v kalibrátorech a vzorcích je přímo úměrná změřené radioaktivitě. Preciznost v sérii 7,6 %, mezi sériemi 9,4 %. Souprava již není k dispozici.

ELISA v sekvenčním uspořádání probíhá v mikrotitrační destičce se zakotvenou protilátkou vůči TATI. Do jamky se přidá standard nebo vzorek a inkubuje se 2 h při 37 °C. Roztok se odsaje a přidá se biotinylovaná protilátka vůči TATI a opět se inkubuje 1 h při 37 °C. Po trojnásobném promytí se přidá avidin s navázanou křenovou peroxidázou a opět se inkubuje 1 h při 37 °C.  Po pětinásobném promytí se přidá chromogen tetrametylbenzidin a reakce je zastavena po 15 – 30 min (37 °C, tma) stop činidlem. Měření se provádí do 5 min při 450 nm (lze použít sekundární vlnovou délku 540 – 570 nm). Rozsah měření je 0,8 – 45 µg/l (vyšší koncentrace analytu lze naředit). Detekční limit je 0,8 µg/l. Preciznost v sérii je < 8 %, mezi sériemi < 10 %.

DELFIA je heterogenní fluorescenční imunoanalýza, kde prodloužená fluorescence Eu3+ je zesílena speciálním roztokem, který uvolňuje Eu3+ do roztoku a současně tvoří jeho ochranný chelát. Mikrotitrační destičky jsou potaženy monoklonální myší protilátkou F62-6E8. Po pipetování vzorku proběhne inkubace 1 h (třepání, laboratorní teplota). Po dvojnásobném promytí se přidá biotinylovaná monoklonální myší protilátka F62-11B3 (které se dává přednost před polyklonální králičí protilátkou) a opět se inkubuje 1 h (třepání, laboratorní teplota). Po čtyřnásobném promytí se přidá streptavidin značený Eu3+ a roztok se inkubuje 30 min; pak následuje další čtyřnásobné promytí, přidá se zesilovací roztok a třepe se 5 min za laboratorní teploty. Fluorescence (Eu3+ emise 613 nm) je přímo úměrná koncentraci TATI ve vzorku a měří se do 1 h. Na základě sedmibodové kalibrace je rozsah metody 0,13 – 150 µg/l. Analytická senzitivita je 0,1 µg/l. Preciznost v sérii 3,5 – 9, 7 %, mezi sériemi 10,7 – 12,5 %.

Významné interference:

Zvýšené hodnoty: zánětlivé gynekologické stavy (CRP > 100 mg/l), pooperační stavy, renální insuficience, akutní pankreatitis, biliární obstrukce, citrulinémie II. typu.