Garamycin, gentamicinum, Gentamycin, Megental, Refobacin, Septopal

gentamicinium sulfuricum
(3R,4R,5R)-2-{[(1S,2S,3R,4S,6R)-4,6-diamino-3-{[(2R,3R,6S)-3-amino-6-[(1R)-1-(methylamino)ethyl]oxan-
2-yl]oxy}-2-hydroxycyclohexyl]oxy}-5-methyl-4-(methylamino)oxan-3,5-diol

Stanovení se provádí v plazmě (antikoagulans EDTA, heparin) nebo séru. Při frakcionované i.v. aplikaci odběr 30 min po infúzi (maximum) a před další aplikací (minimum). Při i.m. aplikaci 60 min po injekci (maximum)
a před další aplikací (minimum). Transportovat v chladu, odstřeďovat v chlazené centrifuze. Existuje riziko adsorpce na separační gely.
Stabilita vzorku 18 – 26 °C (sérum): 4 h, 4 – 8 °C (sérum, plazma): 1 – 7 dnů, -20 °C (sérum): 4 týdny.
Pokud byl pacient současně léčen beta-laktamovými antibiotiky, musí se sérum skladovat zmražené.
Gentamicin sulfát může být součást močových kamenů.

Imunochemické postupy jsou nejběžnější, nejvíce se používá EMIT a FPIA. Dosud nebyla ustanovena referenční metoda.

Dříve se používaly mikrobiologické testy ke kvantitativní analýze aminoglykosidů. Nejvíce se využívala difúze na agarové destičce. Standardy antibiotika ředěné sérem se přidaly na disky filtračního papíru a také se stejně zpracoval neznámý vzorek. Disky se inkubovaly 4 – 18 h Mikroorganismy se staly viditelnými a vytvořily se zóny inhibice růstu o různém poloměru podle koncentrace antibiotika. Podle standardů se určila koncentrace
v neznámém vzorku. Mikrobiologické metody jsou levné, ale pomalé a jejich správnost je velmi proměnlivá, preciznost CV 5 – 50 %; výtěžnost 88 – 125 %.

První imunochemický postup, který byl použit byla kompetitivní RIA. Bakteriální enzym inaktivující gentamicin byl použitý k přípravě radioaktivního konjugátu. Metoda je rychlá, ale poměrně pracná. Preciznost CV 13,0 – 20,6 %; výtěžnost 98 – 125 %.
Homogenní enzymová imunoanalýza EMIT používá při kompetitivní reakci jako konjugát gentamicin s glukóza-6-fosfátdehydrogenázou. Volný konjugát přeměňuje NAD⁺ na NADH a sleduje se nárůst absorbance při
340 nm. Preciznost CV < 10 %, vychýlení +2 %.
Při FPIA soutěží fluoresceinem značený vzorek a volný gentamicin o vazebná místa specifické protilátky. Pouze konjugát vázaný na protilátku poskytuje v polarizačním světle fluorescenční signál. Preciznost CV 1,7 – 2,7 %, vychýlení -5 až +4 %.
CEDIA využívá rekombinantní DNA technologie, kdy donor a akceptor enzymu po spojení vytvoří aktivní
β-galaktosidázu, která reaguje s galaktopyranosidovým substrátem za vzniku barevného produktu. Protilátka proti gentamicinu zabraňuje vzniku aktivního enzymu (preciznost CV < 6 %, vychýlení -8,5 %).
Delší popsané metody jsou bioluminiscenční imunoanalýza s luciferázou a chemiluminiscenční analýza
s esterem akridinu jako značkou (preciznost CV < 6 %, vychýlení -7 %).
Aglutinace také využívá kompetice konjugátu gentamicinu s polysacharidem (ficoll) a gentamicinu ze vzorku
o protilátku vázanou na latexových částicích. Gentamicin ze vzorku brzdí aglutinaci, která se sleduje turbidimetricky. Jiné uspořádání je konjugát s latexem a volná fuzní králičí protilátka. V obou případech dochází k inhibici zákalu gentamicinem ze vzorku. Preciznost CV 7 – 8 %, vychýlení -1 až -4,5 %. Při nefelometrické inhibici se využívá v konjugátu vazby gentamicinu na bílkoviny a následně vytvoření velkých komplexů
s protilátkou rozptylujících světlo, jejichž vznik inhibuje gentamicin ze vzorku.

HPLC předchází extrakce antibiotika na CM-Sephadex. Analýza probíhá na reverzní fázi iontovou párovou chromatografií s následnou postkolonovou derivatizací o-ftalaldehydem za vzniku fluorescenčního produktu, který je detekován. Metoda je rychlá a přesná (reprodukovatelnost CV < 5 %). Touto technologii lze stanovit
i jednotlivé izomery gentamicinu.

Toleranční rozpětí v EKK je 30 %.

Výsledky stanovení gentamicinu snižuje: heparin.
Výsledky stanovení gentamicinu zvyšují: bilirubin > 260 µmol/l, hemoglobin, ikterus, lipémie, měď (intoxikace
u novorozenců), netilmicin (až 25 % křížová reaktivita), sisomicin, aj.