chlamydia antibodies IgG

Sérum je stabilní 1 d za laboratorní teploty, 7 d při 2 – 8 °C, 1 rok při -20 °C.

Fixace komplementu je semikvantitativní test, při kterém řada malých bílkovin reaguje s komplexem antigenu lipopolysacharidu chlamydií a jeho protilátek. Napřed se tepelně denaturuje komplement séra a přidá se standardní množství morčecího komplementu. Dále se přidá antigen lipopolysacharidu chlamydií. Pokud nejsou přítomné protilátky vůči tomuto antigenu, dochází k lýze přidaných ovčích erytrocytů komplementem a vzniká růžové zbarvení. Pokud jsou protilátky přítomné, vytvoří imunokomplex s antigenem lipopolysacharidu chlamydií, ten vyváže komplement a vzniká sraženina. Proto nedochází k lýze ovčích erytrocytů (volný komplement není v dispozici). Při testu se nerozlišují protilátky IgG, IgA a IgM. Citlivost testu je malá, zejména při opakované infekci. Test je poměrně složitý a v laboratořích se používá jen ojediněle.

ELISA probíhá tak, že protilátky specifické vůči chlamydiím obsažené v testovaném vzorku se vážou na antigen v reakčních jamkách testovací destičky (inkubace 30 min při 37 °C). Po promytí (5x) se konjugát protilátky (specifická k γ-řetězci) vůči lidskému IgG  s křenovou peroxidázou váže na protilátky vůči chlamydiím (inkubace 30 min při 37 °C). Po promytí (5x) probíhá rekce tetrametylbenzidinu s enzymovou částí konjugátu. Tato reakce je po 15 min (za laboratorní teploty) zastavena přidáním zastavovacího roztoku (1 M H₂SO₄). Žluté zbarvení, které vzniká, se hodnotí fotometricky při 450 nm do 30 min. Množství navázaného konjugátu, a tedy rovněž intenzita barvy v jamkách, jsou přímo úměrné koncentraci protilátek ve vzorku. Cutoff je 0,154 x pozitivní kontrola + 0,846 x negativní kontrola. Výsledky s absorbancí cutoff – 0,03 jsou negativní, cutoff ± 0,03 jsou neurčité a > cutoff + 0,03 jsou pozitivní.

K dispozici je ELISA souprava umožňující souhrnný průkaz protilátek IgG + IgM vůči chlamydiím. Postup je podobný, jako ELISA IgG protilátek, s tím rozdílem, že konjugát obsahu směs protilátek vůči lidskému IgG i IgM s křenovou peroxidázou.

ELISA může také používat v konjugátu kozí polyklonální protilátky proti lidským imunoglobulinům (G, A, M) označené ALP. V tom případě se používá jako substrát p-nitrofenylfosfát a stop činidlo je 1,2 M NaOH. Inkubace jsou 60 + 30 + 30 min při 37 °C, mezi inkubacemi promývání 4x a měření při 405/620-690 nm do 1 h.

Nepřímá fluorescence je mikroskopická metoda. Fluorescenční imunoanalýza používá 3x7 jamek potažených antigeny C. pneumoniae, C. trachomatis, a C. psittaci. Po pipetování vzorku obsahujícího protilátky vůči chlamydiím proběhne první inkubace 30 min při 37 °C. Po promytí probíhá 30 min při 37 °C reakce s konjugátem, tj. králičí protilátkou (specifická k γ-řetězci) vůči lidskému IgG značenou fluorescein izotiokyanátem. Pak probíhá odečítání ve fluorescenčním mikroskopu.

Western blot používá rekombinantní fúzní proteiny chlamydií, které jsou rozděleny na polyakrylamidovém gelu s 13 % laurylsíranem sodným. Obsah gelu je pak převeden elektroblotem na nitrocelulózovou membránu. Správná exprese a velikost fúzních proteinů je potvrzena monoklonální protilátkou vůči hexahistidinu nebo kozím antisérem vůči glutation-S-transferáze a pak následuje reakce s druhou protilátkou kozí vůči myšímu IgG nebo králičí vůči kozímu IgG konjugovanou s křenovou peroxidázou. Detekce protilátek ze séra a rekombinantních fúzních proteinů jsou provedeny 0,1 µg čištěného proteinu na každý proužek, při ředění séra 1+200. Lidské imunoglobuliny IgG a IgA jsou prokázány druhou protilátkou (ředění 1+1000) konjugovanou s křenovou peroxidázou. Signál je detekován zesílenou chemiluminiscencí.

Falešná negativita: při účinné léčbě (chinolóny, Azitromycin, Josamycin, aj.), chybně připravené vzorky.

Falešná pozitivita: křížová reaktivita (Acinobacter species, Neisseria gonorrhoeae, streptokoky skupiny B).