Francisella tularensis antibodies, F. tularensis antibodies, Pasteurella tularensis antibodies, Rabbit fewer antibodies

Průkaz, případně semikvantitativní stanovení se provádí ve venosní srážlivé krvi. Je třeba vyloučit vzorky chylosní a hemolytické. Následný odběr je za 4, případně 9 týdnů. Stabilita v séru při laboratorní teplotě 2 d, při 2 – 8 °C 14 d, při -20 °C 1 rok.

Mikroaglutinace probíhá v mikrotitračních destičkách s kulatým dnem mezi antigenem F. tularensis (inaktivovaným formaldehydem) a protilátkami séra 18 h při 37 °C. Čím vyšší je aglutinační titr, tím vyšší je pozitivita vzorku. Senzitivita testu je 81,8 %, specificita 98,0 %.

Hemaglutinace využívá koňské erytrocyty senzibilizované vůči lipopolysacharidovým antigenům. Tyto jsou citlivější než lidské, ovčí, králičí nebo kuřecí erytrocyty.

ELISA je založena na schopnosti sérových protilátek vůči F. tularensis inhibovat vazbu monoklonálních myších protilátek vůči lipopolysacharidovým antigenům. Mikrotitrační destičky jsou potaženy lipopolysacharidovým antigenem F. tularensis v hydrogenuhličitanovém pufru (přes noc). Pak jsou promyty 3x fosfátovým pufrem (s Tween 20), aby se odstranil nevázaný antigen. Antigen se blokuje odstředěným mlékem (60 min) a jamky se opět promyjí 3x fosfátovým pufrem (s Tween 20). Následuje imunoreakce se vzorkem (90 min). Po promytí 3x fosfátovým pufrem (s Tween 20) se přidá biotinylovaná monoklonální protilátka (M14B11) vůči lipopolysacharidu a inkubuje se 60 min. Po promytí 3x fosfátovým pufrem (s Tween 20) se přidá konjugát streptavidinu s peroxidázou a inkubuje se 60 min. Po promytí 3x fosfátovým pufrem (s Tween 20) se při dá tetrametyl benzidin a inkubuje se 30 min. Přidá se stop činidlo (1 M HCl) a měří se absorbance při 450 nm, která je nepřímo úměrná množství protilátek vůči F. tularensis. Celý postup probíhá při 37 °C. Senzitivita testu je 93,9 %, specificita 96,1 %.

Alternativní postup používá jako druhou protilátku konjugát kozí protilátky vůči lidskému IgG s křenovou peroxidázou.

WESTERNBLOT používá bakteriální lyzát a čištěný lipopolysacharid jako antigeny. Z SDS-polyakrylamidu jsou antigeny přeneseny na polyvinylidendifluoridovou membránu a 60 min syceny fosfátovým pufrem (s Tween 20), obsahujícím 3 % odstředěného mléka. Po promytí fosfátovým pufrem (s Tween 20) je membrána inkubována 60 min se vzorkem. Po promytí 3x fosfátovým pufrem (s Tween 20) se membrána inkubuje s konjugátem kozí protilátky vůči lidskému IgG s křenovou peroxidázou. Protilátky se vizualizují namočením do 3,3´-diaminobenzidin tetrahydrochloridu + H₂O₂. Pozitivní vzorky obsahují typické lipopolysacharidové pásy s vodorovnými příčkami.

Křížová reaktivita s Brucella species, Proteus OX-19 a Yersinia species. Titry IgG a IgM protilátek mohou zůstat zvýšené i více než 10 let po infekci.