anti-EBV-EA; anti-HHV-4 (EA), antibodies against human herpes virus 4

EA = early antigen (časný)

Stanovení se provádí v séru nebo plazmě (antikoagulans EDTA). Stabilita v séru při 15 – 25 °C 4 – 24 h, při 4 – 8 °C 7 d, při -20 °C 3 – 12 měsíců.

ELISA metoda slouží pro kvalitativní stanovení specifických IgM protilátek vůči časnému difuznímu (rozptýlenému) antigenu viru Epstein-Barrové (rekombinantní peptid EA-D). Jamky mikrotitračních destiček jsou potaženy rekombinantním peptidem EA-D. Po přidání vzorku nebo kalibrátoru se na EA-D naváží specifické IgM protilátky (inkubace 30 min, 18 – 30 °C). Po promytí TRIS pufrem (3x) se, díky IgM protilátkám vůči EA-D přítomným ve vyšetřovaném séru, konjugát (kozí protilátka vůči lidskému IgM spojená s křenovou peroxidázou) naváže na pevnou fázi (inkubace 30 min, 18 – 30 °C). Po promytí TRIS pufrem (3x) je enzymová aktivita po reakci s tetrametylbenzidinem (30 min, 18 – 30 °C) úměrná koncentraci IgM protilátek vůči EA-D ve vzorcích nebo v kalibrátorech. Výsledná intenzita zbarvení jamek se měří po přidání stop činidla (2 M H₂SO₄) do 60 min fotometrem při 450/600-630 nm a je úměrná množství protilátek ve vzorku. Vzorky se hodnotí jako index (poměr) absorbance vzorku k absorbanci hraničního (cut-off) kalibrátoru. Preciznost v sérii 3,8 – 12,8 %, mezi sériemi 9,1 – 17,3 %. Specifita je 94,9 %. Analýzu lze provádět pouze v séru. Vysoký RF může způsobit falešnou pozitivitu.

Falešně negativní hodnoty: u dětí předškolního věku, u imunodeficitních pacientů.

Falešně pozitivní hodnoty: křížová aktivita jiných herpetických virů, polyklonální aktivace B lymfocytů u imunopatologických stavů (mononukleóza).