SILICA CLOTTING TIME, SCT, SCT confirm,

Vyšetření se provádí z citrátové plazmy chudé na destičky, která se získá odběrem žilní krve do zkumavky s citrátem sodným v poměru 1 díl citrátu + 9 dílů krve. Koncentrace citrátu se doporučuje v rozmezí 0,105 až 0,109 mol/l. Při venepunkci je doporučeno používat jehlu o průměru 0,7 až 1,0 mm (tenčí jehly mohou způsobit hemolýzu a předčasnou aktivaci destiček a koagulačních faktorů) a je nutné vyvarovat se použití škrtidla > 1 min. Doprava materiálu do laboratoře do 2 h. Vzorek se centrifuguje 15 min při 3000 g, volíme dvojitou opakovanou centrifugaci a oddělujeme plazmu 0,5 – 1,0 cm nad suspenzí erytrocytů, jelikož trombocyty obsahuji fosfolipidy a v jejich přítomnosti by mohl být test zkreslený. Počet trombocytů v plazmě má být < 10⁴/µl. Alternativou je filtrace plazmy přes mikronový filtr s hustotou 0,22 µm. Vzorek plazmy lze skladovat 4 h při 0 – 8 °C nebo 3 měsíce při -70°C . Pro následné zpracování zmrazené plazmy je nutno plazmu rozmrazovat po dobu 5 min ve vodní lázni při 37 °C, šetrně promíchat a ihned provést měření, nebo skladovat < 2 h při 2 – 8°C. Rozmražené vzorky plazmy nelze opakovaně zamrazovat.

Při zpracování vzorku je nutné vyloučit lýzu trombocytů.

Jedná se o screeningový test v rámci laboratorní diagnostiky protilátek typu lupus antikoagulans. Jde v podstatě o upravený aktivovaný parciální tromboplastinový čas, ve kterém SCT reagencie obsahuje oxid křemičitý (silica) a velmi nízké množství fosfolipidů. V případě úplného vynechání fosfolipidů se citlivost testu snižuje a výsledky jsou velice variabilní v každé skupině pacientů. Test je vysoce citlivý právě při nízké koncentraci fosfolipidů. Vyšetřovaný vzorek se inkubuje při 37°C s SCT reagencií a po přidání Ca²⁺ se měří koagulační čas. V přítomnosti protilátek proti fosfolipidům, dojde k jejich neutralizaci a koagulační čas se prodlužuje. Výsledek se udává jako poměr času vyšetřovaného vzorku a normální plazmy. Upřednostňuje se koloidní forma oxidu křemičitého (je stabilní a méně sedimentuje) a syntetické fosfolipidy (lepší standardizace testu). Jako normální plazmu je lépe použít komerční plazmu, která je deklarovaná na nepřítomnost lupus antikoagulans (LA).

V případě pozitivního výsledku je možné použít konfirmační test s přídavkem fosfolipidů, kde v přítomnosti antifosfolipidových protilátek dojde k jejich neutralizaci a koagulační čas se normalizuje. V případě prodloužení testu (i v nadbytku fosfolipidů) se jedná spíše o deficit faktorů. Proto by měly být ve vyšetřované plazmě nejdříve vyšetřeny koagulační faktory a vyloučeny jejich inhibitory. V případě nedostatku některých z faktorů, a současného podezření na přítomnost LA, je možné vyšetřit test se vzorku smíchaného s normální plazmou v poměru 1:1 (normalizace hladin faktorů). Nevýhodou této úpravy je, že se nemusí zachytit nízké titry antifosfolipidových protilátek (nižší titr neznamená menší klinické projevy).

Nejčastější typ detekce je optický (turbidimetrie) a mechanický (kovová kulička v magnetickém poli). Obě metody mají své výhody i nevýhody. Optické metody jsou finančně méně náročné, jelikož stačí převážně 150 µl reakční směsi v kyvetě, kdežto u mechanické detekce je nutný objem větší, aby se kulička celá ponořila. Mechanická detekce na druhé straně není závislá na zbarvení, resp. zakalení vzorku (ikterické, chylózní, hemolytické vzorky), což lze u optické metody minimalizovat detekci při 671 nm. U optických analyzátorů je nutné zohlednit i způsob odečtu času koagulace z reakční křivky. Většina přístrojů volí inflexní bod křivky, nebo 50 % absorbance, kde počáteční absorbance se bere jako 0 % a konečná 100 %. Nejvhodnější je způsob odečtu matematickým zpracováním křivky, a to její druhou derivací, kde koagulační čas se odečte v maximu druhé derivace původní reakční křivky. Je to část křivky, kde dochází k největšímu nárůstu koagula.

Celková preciznost je 2,5 – 6% 

u pacientů s hematokritem < 0,2 a > 0,6 musí být upravený poměr antikoagulační přísady.

Zkrácení testu: špatný odběr (aktivace koagulace), špatné zpracování vzorku (nedostatečná centrifugace, přítomnost trombocytů, lýza trombocytů).

Prodloužení testu: špatný odběr (sražený vzorek), nedostatek faktoru II, V, X, fibrinogenu, nebo přítomnost inhibitoru proti těmto faktorům; heparin > 1,0 U/ml, vysoký titr protilátek proti FVIII, přímé inhibitory trombinu, antagonisté vitaminu K (warfarin).