17-alfa-hydroxyprogesteron; 17-hydroxypregn-4-en-3,20-dion;

hydroxyprogesterone; 17-hydroxyprogesterone; 17α-hydroxyprogesterone; 17alpha-hydroxyprogesterone; 17-OH progesterone; 17-OHP; 17α-hydroxypregn-4-ene-3,20-dione; 17α-hydroxy-4-pregnene-3,20-dione, 4-pregnen-17α-ol-3,20-dione; pregn-4-en-17α-ol-3,20-dione; Δ⁴-pregnen-17α-ol-3,20-dione;

Gestageno; Gestageno Gador; Oxiprogesteronum; Prodix; Prodox; Setaderm;

Stanovení se provádí v séru nebo plazmě (antikoagulans heparin nebo EDTA). Stabilita v séru či plazmě: 2d při 15 – 25 °C, 4 – 7 d při 4 – 8 °C, 6 m – 1 r při -20 °C. Suchá kapka 30 d za laboratorní teploty. Odběr časně ráno, ale nemusí být nalačno. Novorozenci 4 – 7 den na filtrační papír (lze vyšetřovat i ve slinách), ženy během folikulární fáze cyklu. Opakované rozmrazení se nedoporučuje.

RIA předchází extrakce do éteru. Po protřepání se vodní fáze nechá vymrznout při -18 °C a éterový podíl se dekantuje a odpaří. Přidá se pufr s hovězím albuminem, promíchá se a vzorek se pipetuje do zkumavek pro RIA. (Jiná souprava umožňuje přímou analýzu bez extrakce). Uplatňuje se kompetitivní postup, kdy vzorky a kalibrátory jsou inkubovány 3 h při 37 °C s ¹²⁵I-17hydroxyprogesteronem ve zkumavkách potažených protilátkou vůči 17-hydroxyprogesteronu. Po inkubaci se obsah zkumavek dekantuje a měří se radioaktivita gama-počítačem (1 min). Signál je nepřímo úměrný koncentraci hydroxyprogesteronu ve vzorku. Rozsah měření na základě sedmibodové kalibrace 0,14 – 152 nmol/l, resp. 0,3 – 37,8 nmol/l (vyšší koncentrace lze ředit nulovým kalibrátorem). Analytická citlivost je 0,14 nmol/l. Preciznost v sérii je 5,2 – 7,8 %, mezi sériemi 4,4 – 15,7 %; linearita ředění 82 – 120 %, zpětný výtěžek 88 – 108 %. Křížová reakce: 17α-hydroxypregnenolon 2,9 %, 11-desoxykortizol 1,74 %, ostatní ≤ 0,6 %. Hemolýza, ikterus a lipémie neruší.

ELISA na mikrotitračních destičkách je kompetitivní postup, který používá zakotvenou králičí protilátku vůči 17-hydroxyprogesteronu a do jamek se přidává vzorek nebo kalibrátor a 17-hydroxyprogesteron značený POD. Po inkubaci (1 h, třepání) a promytí 3x se přidá tetrametylbenzidin s H₂O₂ v dimetylsulfoxidovém pufru. Roztok se inkubuje 10 – 15 min (třepání), pak se pipetuje stop činidlo (1 M H₂SO₄). Absorbance při 450 nm se měří do 20 min a je nepřímo úměrná koncentraci 17-hydroxyprogesteronu ve vzorku (při vysokých absorbancích lze použít 405 nebo 415 nm).  Celý postup probíhá za laboratorní teploty. Na základě sedmibodové kalibrace je rozsah metody 0,33 – 60,8 nmol/l (při vyšších koncentracích se ředí nulovým kalibrátorem). Preciznost v sérii je 5,0 – 5,7 %, mezi sériemi 4,9 – 8,6 %; linearita ředění 86 – 107 %, zpětný výtěžek 93 – 104 %. Křížová reaktivita 11-desoxykortizolu je 0,77 %, ostatní ≤ 0,77 %. Silná hemolýza, lipémie a ikterus ruší stanovení. Jiná souprava umožňuje stanovení ve slinách v rozsahu 15,5 – 1520 pmol/l (mez detekce 9,1 pmol/l).

DELFIA je kompetitivní heterogenní fluorescenční imunoanalýza, kde prodloužená fluorescence Eu³⁺ je zesílena speciálním roztokem, který uvolňuje Eu³⁺ do roztoku a současně tvoří jeho ochranný chelát. Na mikrotitračních destičkách je zakotvena kozí protilátka vůči králičímu IgG. Do mikrotitračních destiček se pipetuje 17-hydroxyprogesteron ze vzorku, polyklonální králičí protilátka a hydroxyprogesteron značený Eu³⁺ (inkubace 18 h, 4 °C). Po promytí se přidá zesilovací roztok a třepe se 5 min za laboratorní teploty. Fluorescence (excitace 340 nm, emise 615 nm) je nepřímo úměrná koncentraci 17-hydroxyprogesteronu ve vzorku a měří se do 1 h. Rozsah metody na základě šestibodové kalibrace je 0,8 – 120 nmol/l (při vyšších koncentracích lze ředit). Analytická citlivost je < 0,8 nmol/l. Lipémie ≥ 5 mmol/l a hemolýza ≥ 2 g/l ruší. Při reakci mohou interferovat heterofilní protilátky.

DELFIA je kompetitivní heterogenní fluorescenční imunoanalýza, kde prodloužená fluorescence Eu³⁺ je zesílena speciálním roztokem, který uvolňuje Eu³⁺ do roztoku a současně tvoří jeho ochranný chelát. Na mikrotitračních destičkách je zakotvena kozí protilátka vůči králičímu IgG. Do mikrotitračních destiček se pipetuje 17-hydroxyprogesteron ze vzorku, polyklonální králičí protilátka vůči 17-hydroxyprogesteronu a 17-hydroxyprogesteron značený Eu³⁺ (inkubace 18 h, 4 °C). Po promytí se přidá zesilovací roztok a třepe se 5 min za laboratorní teploty. Fluorescence (excitace 340 nm, emise 615 nm) je nepřímo úměrná koncentraci 17-hydroxyprogesteronu ve vzorku a měří se do 1 h. Rozsah měření do 270 nmol/l. Mez detekce metody byla 2,2 nmol/l. Křížová reaktivita: progesteron 3,6% a 4-pregnen-11β,17-diol-3,20-dion 1,75%.  Preciznost v sérii je 3,1 – 4,21 %, mezi sériemi 3,88 – 6,1 %.

CLIA je kompetitivní luminiscenční imunoanalýza na mikrotitračních destičkách, jejichž jamky jsou potažené streptavidinem. Vzorek, konjugát 17-hydroxyprogesteronu a biotinylovaná protilátka vůči analytu se inkubují 45 min; po pětinásobném promytí se přidají H₂O₂ a luminol. Reakce probíhá 5 min ve tmě. Chemiluminiscence se měří 0,5 – 1,0 s vertikálním luminometrem, nejpozději do 30 min od přidání směsi signálních činidel. Celý postup se provádí za laboratorní teploty. Signál na základě šestibodové kalibrace je nepřímo úměrný koncentraci analytu. Rozsah kalibrace je do 30,4 nmol/l (vyšší koncentrace analytu lze ředit 5x). Analytická citlivost je 0,12 nmol/l. Silná hemolýza, lipémie a ikterus ruší stanovení. Křížová reaktivita < 0,4 %. Preciznost v sérii je 5,1 – 8,0 %, mezi sériemi 5,1 – 9,1 %.

ID-GC-MS používá jako vnitřní standard deuterovaný 11,11,12,12, D₄-17-hydroxyprogesteron. Standard i vzorek jsou extrahovány ve směsi dichlormetan-izooktan 1:2. Organický extrakt je odpařen v proudu dusíku. Pak se přidá aceton a anhydrid heptafluoromáselné kyseliny (derivatizační činidlo) a ponechá se reagovat 1 h za laboratorní teploty. Přebytek činidla se odstraní v proudu dusíku a zbytek se rozpustí v cyklohexanu. Plynová chromatografie se provádí na kapilární koloně 25 m s programovaným tepelným gradientem 100 – 290 °C po dobu 36 min. Hmotnostním spektrometrem se sledují ionty m/z 465,3 a 369,2 pro 17-hydroxyprogesteron, resp. 469,3 a 373,2 pro D₄-17-hydroxyprogesteron. Celková doba trvání analýzy 12 h. Rozsah metody je 1,5 – 608 nmol/l. Analytická citlivost je 0,6 nmol/l. Preciznost v sérii 3 %, zpětný výtěžek 98 %.   

ID-LC-MS-MS používá deuterovaný D₈-17-hydroxyprogesteron jako vnitřní standard. Začíná extrakcí do směsi dichlormetan-izopropylalkohol-hydroxid amonný. Kapalinová chromatografie se provádí na reverzní fázi amid-C16 v gradientu metanol-voda 7 min s napojením na hmotnostní spektrometr s iontovým zdrojem při 500 °C a napětí 5500 V. Sleduje se přechod m/z 331,2 → 109,3 u 17-hydroxyprogesteronu a 339,2 → 113,2 u deuterovaného analogu. Rozsah měření je 0,156 – 80 nmol/l. Analytická citlivost je 0,2 nmol/l. Preciznost v sérii 3,5 – 7,4 %, mezi sériemi 7,9 – 15,4 %; zpětný výtěžek 102 – 115 %.  

Certifikovaný referenční materiál: Sigma-Aldrich H-096.

Toleranční limit EHK: 30 %.

Snížené hodnoty: po menopauze; léky: anabolika, estradiol, perorální kontraceptiva.

Zvýšené hodnoty: deficit 21-hydroxylázy, těhotenství 3. trimestr, normalizace do 2 h po podání hydrokortizonu; léky: ACTH, ketokonazol.