TPA, tkáňový proliferační antigen; tissue polypeptide antigen

Stanovení se provádí v krvi a moči. Venosní srážlivá krev se odebírá nalačno. Transport do laboratoře v den odběru. Sérum je stabilní při 15 – 25 °C maximálně 2 h, při 4 – 8 °C 1 – 2 d, při -20 °C 4 měsíce. Nepoužívat silně hemolytické nebo lipemické vzorky. Vyvarovat se opakovaného rozmrazování. Stanovení se neprovádí v plazmě.

Ke stanovení v moči se používá střední proud první ranní moče. Moc je stabilní po centrifugaci při 2 – 8 °C 3 d, při -20 °C několik měsíců, při -70 °C 1 – 2 roky.

IRMA: je jednokrokový sendvičový postup, který začíná pipetováním séra, kalibrátoru nebo kontroly, polyklonální protilátky vůči TPA značená ¹²⁵I a přídavkem plastových kuliček potažených monoklonální myší protilátkou vůči TPA. Po inkubaci (2 h za laboratorní teploty a třepání) se supernatant odsaje a zkumavky se 3x promyjí vodou. Navázaná aktivita se změří gama-počítačem (1 min). Na základě šestibodové kalibrace je rozsah metody 15 – 4000 U/l (vyšší koncentrace se ředí fosfátovým pufrem); analytická citlivost 15 U/l.  Preciznost v sérii je 2,1 – 4,6 %, mezi sériemi 4,0 – 7,0 %. Jiný postup IRMA je na stejném principu, ale inkubace vyžaduje 5 h.

ELISA: používá jamky mikrotitračních destiček potažené myší monoklonální protilátkou vůči TPA. Přidá se vzorek, biotinylovaná protilátka vůči TPA a streptavidin značený křenovou peroxidázou. Směs se inkubuje po dobu 60 min při 37 °C. Po promytí (5x) přidáme substrát tetrametylbenzidin s H₂O₂ a inkubujeme 10 min při 37 °C; přidáme stop činidlo a měří se při 450 nm do 10 min, kdy absorbance je přímo úměrná koncentraci TPA. Pětibodová kalibrace umožňuje měření v intervalu 0,1 – 40 µg/l. Mez detekce je 0,05 µg/l. Preciznost v sérii je < 10 %, mezi sériemi < 12 %. Reagencie nutno skladovat při 2 – 8 °C. Jiná ELISA na stejném principu přidává jednotlivé složky postupně, a proto trvá 4,5 h; přitom má užší interval měření 0,08 – 5 µg/l.

CLIA je dvojstupňová imunoluminometrická analýza, v níž jsou paramagnetické částice potaženy třemi myšími monoklonálními protilátkami a pro konjugát značený izoluminolem je použita polyklonální koňská protilátka. Během inkubace se TPA přítomný v kalibrátoru, vzorcích či kontrolách váže na monoklonální protilátky vázané na částicích, a konjugovaná protilátka po promytí při druhé inkubaci reaguje s takto vázaným TPA. Nenavázaný materiál se po inkubaci odstraní promývacím cyklem. Po promytí se přidá startér (0,12 % H₂O₂ + 4 % NaOH) a fotonásobičem se měří záblesk; intenzita signálu je nepřímo úměrná koncentraci Tg. Dvoubodová kalibrace je v tripletu pro rozsah měření TPA 0,2 – 4500 U/l. Analytická citlivost je 3 U/l, funkční citlivost 9 U/l TPA. Efekt nadbytku antigenu nebyl prokázán do 500000 U/l TPA. Preciznost v sérii je 1,3 – 3,9 %, mezi sériemi 2,6 – 8,0 %; linearita ředění 110 – 155 %, zpětný výtěžek 82 – 95 %. Ani koncentrace hemoglobinu 10 g/l, triacylglycerolů 33,9 mmol/l a bilirubinu 342 µmol/l neruší. U stanovení využívajících protilátky existuje možnost interference heterofilních protilátek přítomných v pacientském vzorku.

Toleranční limit EHK:25 %.

Hodnoty snižuje: zpracování séra po více než 2 h při laboratorní teplotě.

Hodnoty zvyšuje: kontaminace slinami, těhotenství, radioterapie, hemodialýza, transplantace srdce; zánětlivé stavy (v moči).