Popis vyšetření: CYSTIN

Zařezeno v kategoriích:

Synonyma:

L-cystine, (CYS)2, Cys-Cys, CS, nephrin, h-(cys), l-cystin, 1-cystine, dicysteine, L-cytisine;

β,β´-dithiodialanin

Preanalytická fáze:

Stanovení se provádí v séru nebo moči (buď jednorázový vzorek, nebo sběr za 24 h; nepoužívat konzervanty a vyloučit vitamin C alespoň 2 dny před odběrem). Moč při 15 – 25 °C 1 d, 4 – 8 °C 5 d, při -20 °C 1 – 5 roků. Sérum při laboratorní teplotě i při 2 – 8 °C 1d, při -20 °C 2 – 4 týdny. Stanovení se může provádět také v plazmě (antikoagulans heparin nebo EDTA) nebo likvoru (stabilita v obou materiálech 20 – 25 °C 8 h, 4 – 8 °C 1 d, -20 °C 1 rok). Před analýzou je třeba plazmu nebo sérum deproteinovat.

Poznámky k analytické metodě:

V moči se provádí kvalitativní nebo kvantitativní stanovení.

Při průkazu s azidem sodným a jódem (vzniká bílá pára) reaguje také cystathionin, homocystin, methionin, rhodanidy (u kuřáků).

Při Brandově zkoušce se využívá reakce sulfhydrylových skupin. Cystin je redukován siřičitanem sodným v alkalickém prostředí (1 M NaOH) na cystein a sůl cysteinsulfonové kyseliny. Cystein a další látky (homocystein, homocystin, disulfidy, sulficystein) obsahující -SH skupiny redukují fosfowolframovou kyselinu na wolframan a vznikající modré zbarvení lze měřit fotometricky při 600 nm. Interference další redukujících látek (kyselina askorbová a močová) se odstraňuje chloridem rtuenatým.

Průkaz v moči kyanid-nitroprusidovým testem: k moči se přidá koncentrovaný hydroxid amonný a roztok kyanidu sodného. Po 10 min se přidává po kapkách čerstvý roztok nitroprusidu sodného. Normální moč má žlutou nebo světle hnědou barvu. V přítomnosti cystinu nebo homocystinu vzniká červeno-purpurové zbarvení.

Iontově výměnná chromatografie používá sodný (případně lithný) katex, na kterém se provádí separace proteinového hydrolyzátu nebo supernatantu po deproteinaci. Využívá se změny iontové síly, pH a teplotního gradientu. Po reakci s ninhydrinem se sleduje absorbance při 570 nm. Detekční limit je 10 pmol a linearita v rozsahu 20 – 500 pmol.

HPLC používá obvykle UV-VIS detekci i když existuje také řada postupů s fluorescenční detekcí. Při derivatizaci s fenylizotiokyanátem v předkoloně a chromatografii na ODS (oktadodecylsilyl) koloně s reverzní fázi, se provádí detekce při 254 nm (linearita v rozsahu 20 – 500 pmol). Při derivatizaci s (dimetylamino)azobenzensulfonyl chloridem se provádí detekce při 436 nm (detekční limit je přibližně 1 pmol).

Významné interference:

Hodnoty v séru jsou nižší po hemolýze (cystin se váže na proteiny). Falešně negativní výsledky v moči způsobuje: penicilamin (u cystinuriků), thiola (α2-merkaptopropionylglycin), histidin, vysoká diuréza, delší stání moče při pokojové teplotě, konzervace kyselými prostředky (sníží rozpustnost cystinu), skladování v lednici (sníží rozpustnost), odlití moče nad sedimentem.

Hodnoty zvýšeny v séru při vysokém věku (> 80 let).

Hodnoty zvyšuje v moči: časné těhotenství, vegetariánství, ketonurie u diabetiků, příliš koncentrovaná moč, zvýšení proteinového katabolismu, penicilamin (až 4x u zdravých), podání N-acetylcysteinu, alkalická moč, starší moč.