globulin nerozpustný za studena (cold-insoluble globulin), faktor zabraňující želatinaci (anti-gelatin factor)

Stanovení se provádí v plazmě (antikoagulans K₂EDTA nebo heparinát lithný), séru nebo supernatantu buněčných kultur, vaginálním výtěru, případně v moči. Odstranění buněčných elementů je zapotřebí co nejdříve po odběru. Při vysoké koncentraci fibronektinu může dojít k efektu nadbytku antigenu.
Stabilita vzorku: 4 – 8 °C (sérum, plazma): 24 h, -20 °C (sérum, plazma): pro delší uchování vzorků. Nicméně jinde je uvedeno, že při teplotě 37 °C nebo 4 – 8 °C vzorky neztrácejí žádnou aktivitu po 72 h. Rozmrazení vzorků se doporučuje pouze jednou (u ředěných vzorků je i tak ztráta reaktivity přibližně 30 %) a pozvolna.

Imunochemické postupy jsou nejběžnější a mohou být plně automatizované. Používá se ELISA, turbidimetrie
a laserová nefelometrie.
Jednoduché provedení nabízejí sendvičové ELISA soupravy na mikrotitračních destičkách, potažených protilátkou proti fibronektinu. Po navázání fibronektinu se v dalším kroku přidá druhá biotinylovaná protilátka
a peroxidáza s navázaným streptavidinem, který se spojí s biotinem. Po odstranění přebytku peroxidázy se přidá tetrametylbenzidin a vzniklé zbarvení se sleduje vertikální fotometrií při 450 nm. Průměrná reprodukovatelnost v sérii je CV 5,3 % (2 – 10 %), mezi sériemi 6,7 % (6,2 – 9,7 %); výtěžnost 109,4 % (93,2 – 122,6 %).
Jiný ELISA postup používá králičí antisérum proti fibronektinu. Na protilátku se váže fibronektin ze vzorku
a fibronektin značený ALP. Pak se přidá druhá protilátka (kozí γ-globulin proti králičímu antiséru). Sraženina se centrifuguje a k precipitátu se přidá p-nitrofenylfosfát. Vzniklý p-nitrofenol se měří při 403 nm. Reprodukovatelnost v sérii je CV 6,8 %, mezi sériemi 25,4 %.
Membránová imunoanalýza má na pevné fázi zakotvenou polyklonální kozí protilátku proti fibronektinu a druhá monoklonální protilátka (FDC-6) pro vytvoření fibronektinového sendviče je značená enzymem.
Turbidimetrické metody využívají kozí nebo ovčí protilátky proti lidskému fibronektinu a detekce se provádí při 340 nm v E.P. nebo kinetickém režimu. Reprodukovatelnost v sérii je CV 5,5 – 8,5 %, mezi sériemi 15,4 –
20,7 %.
Nefelometrická metoda používá králičí antisérum proti lidskému fibronektinu. Reprodukovatelnost v sérii je CV 0,38 %, mezi sériemi 1,9 %.
Další metody se v laboratorní praxi běžně nepoužívají.
IRMA technologie používá zkumavek s protilátkou proti fibronektinu na kterou se váže fibronektin a po propláchnutí se přidává myší nebo králičí imunoglobulin značený ¹²⁵I. Metoda je zdlouhavá.
Při raketkové elektroimunodifuzi se používá gel s protilátkami proti fibronektinu ve veronalovém pufru.
K vybarvování slouží Coomassie Brilliant Blue R-250. Reprodukovatelnost CV mezi sériemi je 8,3 %.

Výsledky stanovení fibronektinu snižují: delší skladování vzorku v lednici (> 24 h), hladovění, nízká porodní hmotnost, aj.
Výsledky stanovení fibronektinu zvyšují: obezita, těhotenství, tyroxin, aj.