|
Popis vyšetření: SUPEROXIDDISMUTÁZA
Zařezeno v kategoriích: Synonyma:
superoxiddismutasa, SOD, EC 1.15.1.1; superoxide dismutase, superoxidase dismutase, copper-zinc superoxide dismutase, Cu-Zn superoxide dismutase, ferrisuperoxide dismutase, superoxide dismutase I, superoxide dismutase II, Cu,Zn-SOD, Mn-SOD, Fe-SOD, SODF, SODS, SOD-1, SOD-2, SOD-3, SOD-4, hemocuprein, erythrocuprein, cytocuprein, cuprein, hepatocuprein; systematický název: superoxid:superoxid oxidoreduktasa; superoxide:superoxide oxidoreductase. Preanalytická fáze:
Krev se odebírá do heparinu, EDTA nebo citrátu nebo bez antikoagulancií. Vyloučit je třeba hemolýzu a chylozitu. Stabilita v plazmě nebo séru 24 h (?) při 2 – 8 °C, dlouhodobě při -20 (-80) °C. Jinde uvedena stabilita 96 h (???) při 37 °C. Poznámky k analytické metodě:
Fotometrie: sodná 2-(4-jódfenyl)-3-(4-nitrofenyl)-5-(2,4-disulfofenyl)-2H-tetrazoliová sůl dává redukcí superoxidovým aniontem formazanové barvivo a superoxid se přitom oxiduje na kyslík. Rychlost redukce je přímo úměrná aktivitě xantinoxidázy (oxiduje xantin na kyselinu močovou) a je inhibována SOD. Absorbance při 440 nm je přímo úměrná množství superoxidového aniontu a aktivita SOD může být kvantifikována jako pokles absorbance při 440 nm, tedy množství zablokovaného superoxidového aniontu. Reakce séra, tetrazoliové soli a xantinoxidázy probíhá 20 min při 37 °C a obvykle se měří při 450 nm (někdy 490 nm). Měření lze provádět v rozsahu 0,044 – 4 kU/l, tj. 0,73 – 66 µkat/l (jiné soupravy 0,005 – 80 kU/l, resp. 0,001 – 200 kU/l). Detekční limit 0,044 kU/l. Preciznost v sérii 4,6 – 16,8 %, mezi sériemi 6,1 – 13,8 %; zpětný výtěžek 90,4 – 105,6 %. ELISA SOD1 (Cu+Zn): Používají se jamky potažené monoklonální myší protilátkou vůči SOD1 se přidá vzorek (ředěný alespoň 20x!) a inkubuje se. Po promytí se přidá biotinylovaná monoklonální myší protilátka vůči SOD1 a křenová peroxidáza, konjugovaná s avidinem. Směs se inkubuje 120 min za laboratorní teploty (třepání). Po promytí (3x) se přidá biotinylovaná protilátka vůči SOD1 a inkubuje se 60 min za laboratorní teploty. Po promytí (3x) se přidá konjugát streptavidinu s POD. Směs se inkubuje 30 min za laboratorní teploty. Po promytí (3x) se přidá tetrametylbenzidin a inkubuje se 5 – 10 min za laboratorní teploty ve tmě. Pak se přidá stop činidlo (0,5 M H2SO4) a měří se do 20 min při 450 nm. Rozsah měření na základě osmi kalibrátorů do 12,5 – 800 ng/l. Absorbance je přímo úměrná množství SOD1. Citlivost měření je 12,5 ng/l SOD1. Preciznost v sérii je 2,1 – 7,7 %, mezi sériemi 5,1 – 9,6 %; zpětný výtěžek 98,0 – 106,1 %. ELISA SOD2 (Mn+Fe): Používají se jamky potažené monoklonální myší protilátkou vůči SOD2 se přidá vzorek (ředěný alespoň 20x!) a inkubuje se. Po promytí se přidá biotinylovaná monoklonální myší protilátka vůči SOD2 a křenová peroxidáza, konjugovaná s avidinem. Směs se inkubuje 120 min za laboratorní teploty (třepání). Po promytí (3x) se přidá biotinylovaná protilátka vůči SOD2 a inkubuje se 60 min za laboratorní teploty. Po promytí (3x) se přidá konjugát streptavidinu s POD. Směs se inkubuje 30 min za laboratorní teploty. Po promytí (3x) se přidá tetrametylbenzidin a inkubuje se 5 – 10 min za laboratorní teploty ve tmě. Pak se přidá stop činidlo (0,5 M H2SO4) a měří se do 20 min při 450 nm. Rozsah měření na základě osmi kalibrátorů do 25 – 5000 ng/l. Kalibrace je nelineární a nelze ji extrapolovat nad hodnotu kalibrátoru 1600 ng/l SOD2. Absorbance je přímo úměrná množství SOD2. Citlivost měření je 25 ng/l SOD2. Preciznost v sérii je 0,4 – 9,7 %, mezi sériemi 0,2 – 13,8 %; zpětný výtěžek 98,6 – 104,5 %. Významné interference:
Hodnoty snižuje: kouření, vyšší věk, hemodialýza, hepatitida, cerebrovaskulární chronické choroby, akutní infarkt myokardu, kardiochirurgické výkony, první menstruace. Hodnoty zvyšuje: chronický alkoholismus, diabetes mellitus, cytomegalovirus, Parkinsonova nemoc, urémie, cévní revaskularizační výkony, cvičení. |