TK, thymidinkinasa, tymidinkináza, EC 2.7.1.21;

thymidine kinase, 2´-deoxythymidine kinase;

systematický název: ATP:thymidin 5´-fosfotransferasa; ATP:thymidine 5´-phosphotransferase.

Odebírá se venózní srážlivá krev nalačno před nasazením cytostatik. Doprava do laboratoře do 6 h po odběru při 4 °C. Sérum je stabilní při 4 – 8 °C 1 – 5 d, při -20 °C 6 – 12 měsíců. Opakované rozmrazování se nedoporučuje.

Všechny soupravy stanovují pouze thymidinkinázu 1 i když se to v návodech někdy nepíše.

Radioenzymatické stanovení (REA): Souprava je optimalizována pro stanovení izoenzymu TK 1 (TK 1 je také známa pod označením fetální TK, dTK-F a cytosol-TK). Toto stanovení TK je založeno na enzymatické fosforylaci (probíhá 3,5 h při 37 °C) jodem značeného substrátu (5-[¹²⁵I]-deoxyuridinu), katalyzované TK obsaženou ve vzorcích. 5-[¹²⁵I]-deoxyuridin se tak přeměňuje na 5-[¹²⁵I]-deoxyuridin monofosfát. Ten se oddělí od zbylé reakční směsi (během 30 min při 18 – 25 °C) sorpcí na ionexu. Po odsátí supernatantu se sorbent důkladně promyje 50 % acetonem (4x vždy se sedimentací 5 min) a vázaná aktivita ¹²⁵I se po posledním odsátí měří 1 min na gama-počítači. Aktivita TK ve vzorcích je přímo úměrná změřené radioaktivitě a získá se interpolací ze sedmibodové kalibrační křivky. Enzymová aktivita je vyjádřena v U/l (1 U = 1,2 pmol/s = 1,2 pkat). Rozsah měření je 0,22 – 80 U/l (0,26 – 96 pkat/l). Analytická citlivost je 0,22 U/l (0,26 pkat/l), funkční citlivost je 1,34 U/l (1,61 pkat/l). Preciznost v sérii je do 5,6 %, mezi sériemi do 8,6 %. Nedoporučuje se stanovovat lipemické, ikterické, hemolytické a mikrobiálně kontaminované vzorky.

ELISA: Používají se jamky potažené protilátkou vůči TK1 se přidá vzorek a inkubuje se 2 h při 37 °C. Kapalina se odstraní, ale jamky se nepromyjí a přidá se biotinylovaná protilátka vůči TK1. Inkubuje se 1 h při 37 °C a promývá se 3x (vždy s prodlevou 2 min); přidá se křenová peroxidáza, konjugovaná s avidinem. Směs se inkubuje 1 h při 37 °C. Po promytí (5x - vždy s prodlevou 2 min) se přidá tetrametylbenzidin a inkubuje se 15 – 30 min při37 °C ve tmě. Pak se přidá stop činidlo a měří se do 5 min při 450/540-570 nm. Rozsah měření na základě osmi kalibrátorů do 62,5 – 4000 ng/l (vyšší koncentrace je možné naředit). Absorbance je přímo úměrná množství TK1. Citlivost měření je 15,6 ng/l TK1. Preciznost v sérii je < 8 % %, mezi sériemi < 10 %. Silně hemolytické vzorky nelze analyzovat.

CLIA je nepřímá modifikovaná dvoufázová kompetitivní analýza. Toto stanovení používá nejdříve enzymovou reakci, při které TK ze vzorku převádí AZT (3 -azido-3 -deoxythymidin) na AZTMP (3 -azido-3 -deoxythymidinmonofosfát), po které následuje kvantitativní stanovení AZTMP kompetitivní imunoanalýzou. Měřítkem množství TK přítomné ve vzorku je množství AZT převedeného na AZTMP. Při tomto stanovení je vzorek 40 min inkubován s reakčními pufry (obsahují také králičí a kozí IgG) a paramagnetickými částicemi potaženými polyklonální protilátkou proti AZTMP. Na povrch částic je navázán králičí IgG proti kozím antigenům a pak kozí polyklonální protilátka proti AZTMP. Během první inkubace se AZTMP váže na pevnou fázi. Pak je přidán analog AZTMP konjugovaný s derivátem izoluminolu. V průběhu druhé inkubace soutěží o vazbu konjugát značené látky s AZTMP v roztoku. Po 20 minutách inkubace je nenavázaný materiál odstraněn promývacím cyklem. Po promytí se přidá startér (0,12 % H₂O₂ + 4 % NaOH) a fotonásobičem se měří záblesk. Intenzita signálu je nepřímo úměrná koncentraci TK. Dvoubodová kalibrace se provede v tripletu pro rozsah měření TK 0,5 – 100 U/l, tj. 0,6 – 120 pkat/l (vyšší koncentrace se ředí diluentem). Analytická citlivost je 0,5 U/l, tj. 0,6 pkat/l, funkční citlivost 5 U/l, tj. 6 pkat/l TK. Preciznost v sérii je 2,7 – 9,2 %, mezi sériemi 5,4 – 19,5 %; zpětný výtěžek 92 – 109 %. Ani koncentrace hemoglobinu 5 g/l, triacylglycerolů 33,9 mmol/l a bilirubinu 342 µmol/l neruší.

Hodnoty zvyšují: cytostatika (metotrexát, 5-fluorouracil – blokují syntézu DNA de novo  s aktivací náhradní cesty), deficit vitaminu B₁₂.