Popis vyšetření: FENYTOIN

Zařezeno v kategoriích:

Synonyma:

Antisacer, Dilantin, Dintoina, difenylan sodný, difenylhydantoin, Ditan, Epanutin, Epinat, Fenitoina, Fosfenytoin, Sodanton

Preanalytická fáze:

Odběr nejméně 4 - 5 h, případně 8 h po aplikaci nebo před následující dávkou. Stanovení se provádí v séru popřípadě v plazmě (antikoagulanty K2EDTA nebo heparin). Riziko falešně nízkých výsledků v důsledku adsorpce léku na separační gely.
Stabilita vzorku 20 – 25 °C (sérum, plazma): 2 dny, 4 – 8 °C (sérum): 4 týdny, 4 – 8 °C (plazma): 6 týdnů, -20 °C (sérum): 5 měsíců, -20 °C (plazma): 1 rok.

Poznámky k analytické metodě:

Imunochemické postupy jsou nejběžnější a mohou být plně automatizované. Používá se radioimunoanalýza, enzymová imunoanalýza (EMIT, CEDIA i ELISA) a fluorescenční homogenní polarizační technika (FPIA)
a chemiluminiscenční analýza. Rovněž jsou k dispozici soupravy pro imunonefelometrii a imunoturbidimetrii. GLC a HPLC se používají spíše jako srovnávací a forenzní metody, než pro rutinní praxi.

Pro kompetitivní RIA 125I-fenytoin se uvádí vychýlení -1 až +26 % a výtěžnost 100 – 109 %.
EMIT používá jako značku glukóza-6-fosfátdehydrogenázu a kompetitivní uspořádání imunochemické reakce. Citlivost je poměrně malá, což je způsobeno stérickou zábranou po reakci konjugátu antigen-enzym
s protilátkou a homogenním kompetitivním uspořádáním. Reprodukovatelnost v sérii CV 5,2 – 6,0 %, mezi dny 7,2 – 8,3 %, výtěžnost 107,5 – 108,5 %.
Homogenní enzymová imunoanalýza CEDIA používá β-galaktosidázu geneticky upravenou na dva inaktivní fragmenty. Donorová část je navázaná na fenytoin (konjugát) a konkuruje s lékem ze vzorku o omezený počet vazebných míst protilátky. Protilátka kryje vazebné místo donoru a proto po přidání volného akceptoru se může vytvořit aktivní enzym jen z volného konjugátu a nikoliv z imunokomplexu. Substrátem pro barevnou detekční reakci je β-D-galaktopyranosid chlorfenolové červeně a uvolněné barvivo se sleduje při 575 nm. Reprodukovatelnost v sérii CV 2,0 – 2,8 %, mezi dny 4,7 – 6,8 %; výtěžnost 97,8 – 105,9 %, detekční limit
3 µmol/l.
Kompetitivní ELISA používá křenovou peroxidázu jako marker. Reprodukovatelnost v sérii CV 3,3 – 10,2 %, mezi dny 5,1 – 13,2 %; výtěžnost 90 – 96 %.
Fluorescein jako marker se používá při homogenní fluorescenční polarizační imunoanalýze (FPIA). Celková reprodukovatelnost CV je 7 %, vychýlení +7 %.
Jiná fluorescenční imunoanalýza používá fluorescein izothiokyanát (FITC) jako značku. V prvním kroku dochází k soutěži mezi značeným a neznačeným fenytoinem o omezený počet vazebných míst první protilátky. Pak se přidá druhá protilátka a vznikne precipitát, který se centrifuguje. V supernatantu je fluorescence přímo úměrná koncentraci fenytoinu ve vzorku.; výtěžnost 92 – 106,5 %; citlivost 1,2 pmol/l na zkumavku.
Kompetitivní chemiluminiscence s esterem akridinu jako značkou má reprodukovatelnost v sérii CV 2,7 – 2,9 %, mezi dny 2,9 – 4,1 %.
Imunoturbidimetrický postup používá latexové částice potažené fenytoinem, které soutěží o omezený počet vazebných míst na protilátce s fenytoinem ze vzorku. Senzitivita metody je 3,13 µmol/l; reprodukovatelnost celková CV 3,7 – 5,2 %; výtěžnost 94,4 – 101,4 %.
Kinetická nefelometrie umožňuje reprodukovatelnost v sérii CV 2,0 – 5,5 %, mezi dny 3,1 – 4,5 %.

Plynová chromatografie uvádí reprodukovatelnost v sérii CV 5,1 – 5,9 %, mezi dny 6,8 – 7,6 %.
K dispozici je také stanovení HPLC s vodní mobilní fází a UV detekcí. Mezidenní reprodukovatelnost je CV 0,5 – 10 %; výtěžnost 90 -110 %.

Toleranční rozpětí v EKK je 24 %.

Významné interference:

Výsledky stanovení fenytoinu snižují: antacida, bleomycin, cis-platina, etanol, fenylbutazon, karbamazepin, kortikosteroidy, kyselina listová, nitrofurantoin, ostatní barbituráty, oxacilin, rifampin, salicyláty, sulfisoxazol, sulfonylmočovina, valproová kyselina, vinblastin, živočišné uhlí, aj.
Výsledky stanovení fenytoinu zvyšují: amiodaron, azapropazon, cimetidin, citronan, disulfiram, flukonazol, fluoridy, halotan, hemoglobin (10 g/l +10 %), chloramfenikol, ibuprofen, imipramin, izoniazid, kyselina arachidonová, levedopa, metronidazol, mikonazol, nifedipin, omeprazol, oxalát, sulfonamidy, topiramát, trazodon, triacylglyceroly (11,3 mmol/l +12 %), tricyklická antidepresiva, trimetoprim, aj.