NAT, indirect antiglobuline test, IAT, indirect Coombs test, nepřímý Coombsův test, 

K vyšetření se používá jak sérum, tak plazma. Jako antikoagulační činidlo jsou nejvhodnější draselné soli kyseliny etylendiamintetraoctové (EDTA). U nesrážlivé krve je nutné vyvarovat se odběrovým zkumavkám se separačním gelem. Vzorek se centrifuguje 10 min při 1800 až 2500 g, nejlépe dle doporučení výrobce odběrového systému.

Materiál je stabilní 12 h při 18 – 25 °C, 7 d při 2 – 8°C. Oddělenou plazmu nebo sérum je možné skladovat 6 měsíců při teplotě ≤ -20°C

Nepřímý antiglobulinový test je imunoaglutinační metoda založena na reakci antigen-protilátka. Jedná se o screeningový test, který slouží k odhalení přítomnosti alloprotilátek vůči erytrocytárním antigenům. V praxi se požívá komerčně dodávaný panel s 3 vyšetřovacími erytrocyty, které musí být krevní skupiny 0 (aby se vyloučila pozitivní reakce v AB0 systému). Minimální zastoupení antigenu je: C, C^W, c, D, E, e, K, k, Fy^a, Fy^b, Jk^a, Jk^b, S, s, M, n, Le^a, přičemž jedny screeningové krvinky by mněly mít fenotyp DCe/DCe (R₁R₁) a jedny DcE/DcE (R₂R₂). Antigeny Fy^a, Fy^b, Jk^a, Jk^b, S, s, by měly být v homozygotním zastoupení. Samotný test je možné provést několika technikami. U zkumavkového testu se vyšetřované sérum resp. plazma inkubuje s panelem erytrocytů 1 h při 37°C. Po inkubaci se zkumavky centrifugují (zesílení aglutinace) a pozoruje se případná aglutinace (jak volným okem, tak pod mikroskopem). Pozitivní reakce se může projevit i hemolýzou erytrocytů. Většina klinicky významných protilátek je třídy IgG a tak v tomto kroku dojde převážně jenom k senzibilizaci erytrocytů. Senzibilizaci odhalíme AGH testem (proti lidskému globulinu). Obsah zkumavky se nejprve minimálně 3x propere v nadbytku fyziologického roztoku a po poslední dekantaci se k sedimentu erytrocytů přidá AGH sérum, sleduje se aglutinace, která se může zesílit po 5 min. inkubaci při 37°C. Aglutinace se pozoruje jak volným okem, tak pod mikroskopem. AGH je citlivá na přítomnost jakýchkoli lidských globulinů, promytí erytrocytů je nutné, aby se odstranili i stopové množství séra, resp. plazmy. V případě negativní reakce je nutné provést kontrolu promytí, kontrolními senzibilizovanými krvinkami. Jsou to komerční krvinky, které mají na svém povrchu navázané protilátky třídy IgG. V případě správného postupu senzibilizované krvinky reagují s AGH a objeví se aglutinace. V případě negativní reakce je nutné celý postup opakovat s důrazem na odstranění stop lidských globulinů. Při použití erytrocytů resuspendovaných v LISS (roztok o nízké iontové síle), lze zkrátit inkubaci z 1 h na 15 min. Za standard je považována v dnešní době technika sloupcové aglutinace, nebo na pevné fázi. Při hodnocení se semikvantitativně posuzuje síla reakce: 0 resp. negativní a pozitivní 1+ až 4+.

U vyšetření sloupcovou aglutinací se využívá speciální mikrozkumavka s vrstvou dextran-akrylamidového gelu nebo skleněných mikročástic, kterou musí erytrocyty překonat při centrifugaci. Vrstvou projdou jenom neaglutinované erytrocyty. Výhodou je, že AGH sérum je obsaženo přímo v reakčních mikrozkumavkách. Metoda sloupcové aglutinace může být také plně automatizovaná; odečet reakce je na základě analýzy obrazu. Při vyšetření používáme 0,8 – 1 % (dle způsobu provedení) suspenzi erytrocytů v LISS.  Při provádění vyšetření metodou sloupcové aglutinace se erytrocyty nemusí promývat, jelikož nedochází ke kontaktu vyšetřovaného séra s AGH sérem.

Princip metody vyšetření na pevné fázi spočívá v tom, že v mikrotitračních jamkách jsou imobilizované lidské erytrocyty, jejichž antigeny jsou využity k navázání specifických IgG erytrocytárních protilátek ze vzorku. Promytím jsou odstraněny nadbytky protilátek a v dalším kroku se přidá suspenze indikátorových erytrocytů s navázaným anti-IgG. Kontakt antigenu s protilátkou je podpořen centrifugací. V případě pozitivity jsou indikátorové erytrocyty zadrženy na dně jamek tím, že na povrchu imobilizované reagenční vrstvy tvoří anti-IgG-IgG komplexy. Při negativní reakci se indikátorové erytrocyty usadí na dně jamky jako terčík.

přítomnost nespecifických protilátek na kteroukoli složku diagnostických roztoků, hemolýza, přítomnost patologických (monoklonálních) imunoglobulinů.