nemá

Vyšetřuje se v séru, plazmě (antikoagulans EDTA, citrát nebo heparin) nebo stolici. Sérum nebo plazma mohou být skladovány 2 – 7 d při 2 – 8 °C, nebo déle při -20 °C.

Aglutinace Pro reakci s Yersinia enterocolitica se používá sérum ředěné dvojkovou řadou od 1:20 fyziologickým roztokem. Inkubace se provádí přes noc při 50 °C. Aglutinace se hodnotí vizuálně jako nejvyšší ředění séra, kdy ještě došlo k aglutinaci protilátek s baktériemi. Negativní výsledek je při titru < 1:160.

Komplement fixační reakce V reakci je pět složek: antigen (buňky králičích nebo křeččích ledvin infikované bakterií Yersinia enterocolitica), vyšetřované sérum pacienta (musí se tepelně inaktivovat, aby se inaktivoval endogenní komplement), komplement, beraní krvinky, králičí sérum s protilátkami proti beraním krvinkám (tzv. amboceptor). Princip reakce lze popsat ve 4 krocích: smísí se zkoumané sérum, v němž byl inaktivován vlastní komplement a příslušný antigen (pozitivita: vzniknou komplexy antigen-protilátka, negativita: komplexy antigen-protilátka nevzniknou); přidá se morčecí komplement alexin (pozitivita: komplement se vyváže na komplexy antigen-protilátka, negativita: komplement se nevyváže a je nadále aktivní); mimo reakci se připraví tzv. hemolytický systém, tj. ovčí krvinky s navázanými protilátkami proti těmto (zdrojem protilátek je obvykle králičí antisérum proti ovčím krvinkám); do reakce se přidá hemolytický systém (pozitivita: komplement je vyvázán, tedy neaktivní a nedojde k hemolýze, negativita: komplement se naváže na hemolytický systém tj. vlastně komplexy antigen-protilátka a dojde k hemolýze. Reakce se hodnotí v několika ředěních séra. Jako výsledek se udává nejvyšší ředění séra (titr), při kterém ještě nedošlo k hemolýze. Reakce je citlivá, ale nelze rozlišit jednotlivé třídy protilátek, nicméně IgM protilátky aktivují komplement 168x více než IgG protilátky.

ELISA IgG umožňuje stanovení protilátek třídy IgG vůči Yersinia enterocolitica v séru. Reakční jamky mikrotitračních destiček jsou potažené antigenem Yersinia enterocolitica. V prvním kroku reakce jsou ředěné vzorky sér inkubovány v jamkách 60 min za laboratorní teploty. V případě pozitivního vzorku se specifické protilátky váží k antigenům Yersinia enterocolitica. Po promytí pufrem (3x) se k detekci navázaných protilátek provádí následně inkubace 30 min za laboratorní teploty s konjugátem králičí protilátky vůči lidskému IgG značené peroxidázou, který je schopen vyvolat barevnou reakci, následně po promytí pufrem (3x), s přidaným tetrametylbenzidinem a H₂O₂. Po 20 min (za laboratorní teploty ve tmě) se reakce zastaví stop činidlem (0,5 M H₂SO₄) a intenzita vzniklého zabarvení je přímo úměrná koncentraci IgG protilátek proti antigenům Yersinia enterocolitica. Měření se provádí při 450/620 nm na základě čtyř kalibrátorů do 60 min v rozsahu 1,9 – 180 kU/l. Analytická senzitivita 1,92 kU/l. Přesnost v sérii 5 %, mezi sériemi 3,9 – 12,8 %; zpětný výtěžek 87 – 100 %, linearita ředění 70 – 113 %. Senzitivita: 100 %, specifita: 92 %. Neruší hemoglobin 8 g/l, bilirubin 513 µmol/l a triacylglyceroly 5,65 mmol/l.

Jiná souprava ELISA IgG používá jako marker ALP, chromogen 4-nitrofenylfosfát, stop činidlo 1,2 M NaOH a měření při 405 nm.

ELISA IgA umožňuje stanovení protilátek třídy IgA vůči Yersinia enterocolitica v séru. Reakční jamky mikrotitračních destiček jsou potažené antigenem Yersinia enterocolitica. V prvním kroku reakce jsou ředěné vzorky sér inkubovány v jamkách 60 min za laboratorní teploty. V případě pozitivního vzorku se specifické protilátky váží k antigenům Yersinia enterocolitica. Po promytí pufrem (3x) se k detekci navázaných protilátek provádí následně inkubace 30 min za laboratorní teploty s konjugátem králičí protilátky vůči lidskému IgA značené peroxidázou, který je schopen vyvolat barevnou reakci, následně po promytí pufrem (3x), s přidaným tetrametylbenzidinem a H₂O₂. Po 20 min (za laboratorní teploty ve tmě) se reakce zastaví stop činidlem (0,5 M H₂SO₄) a intenzita vzniklého zabarvení je přímo úměrná koncentraci IgA protilátek proti antigenům Yersinia enterocolitica. Měření se provádí při 450/620 nm na základě čtyř kalibrátorů do 60 min v rozsahu 1,0 – 180 kU/l. Analytická senzitivita 1,02 kU/l. Přesnost v sérii 10,3 %, mezi sériemi 5,2 – 13,0 %; zpětný výtěžek 88 – 107 %, linearita ředění 65 – 116 %. Senzitivita: 100 %, specifita: 92 %. Neruší hemoglobin 8 g/l, bilirubin 513 µmol/l a triacylglyceroly 5,65 mmol/l.

Jiná souprava ELISA IgA používá jako marker ALP, chromogen 4-nitrofenylfosfát, stop činidlo 1,2 M NaOH a měření při 405 nm.

ELISA IgM umožňuje stanovení protilátek třídy IgA vůči Yersinia enterocolitica v séru. Reakční jamky mikrotitračních destiček jsou potažené antigenem Yersinia enterocolitica. V prvním kroku reakce jsou ředěné vzorky sér inkubovány v jamkách 60 min za laboratorní teploty. V případě pozitivního vzorku se specifické protilátky váží k antigenům Yersinia enterocolitica. Po promytí pufrem (3x) se k detekci navázaných protilátek provádí následně inkubace 30 min za laboratorní teploty s konjugátem králičí protilátky vůči lidskému IgM značené peroxidázou, který je schopen vyvolat barevnou reakci, následně po promytí pufrem (3x), s přidaným tetrametylbenzidinem a H₂O₂. Po 20 min (za laboratorní teploty ve tmě) se reakce zastaví stop činidlem (0,5 M H₂SO₄) a intenzita vzniklého zabarvení je přímo úměrná koncentraci IgM protilátek proti antigenům Yersinia enterocolitica. Měření se provádí při 450/620 nm na základě čtyř kalibrátorů do 60 min v rozsahu 1,0 – 180 kU/l. Analytická senzitivita 1,02 kU/l. Přesnost v sérii 10,3 %, mezi sériemi 5,2 – 13,0 %; zpětný výtěžek 74 – 98 %, linearita ředění 66 – 114 %. Senzitivita: 100 %, specifita: 92 %. Neruší hemoglobin 8 g/l, bilirubin 513 µmol/l a triacylglyceroly 5,65 mmol/l.

Jiná souprava ELISA IgM používá jako marker ALP, chromogen 4-nitrofenylfosfát, stop činidlo 1,2 M NaOH a měření při 405 nm.

Imunoblot (IgG, IgA, IgM) Patogeny Yersinia enterocolitica jsou převedeny na nitrocelulózovou membránu pomocí rozprašovače. Pak je membrána rozstříhána na jednotlivé proužky. Na proužky se nanesou vzorky séra nebo plazmy; imunoreaktanty se nechají inkubovat 30 min. Protilátky vytvoří s patogeny imunokomplexy, volné protilátky se vymyjí (3x5 min promývacím TRIS pufrem). Pak se proužky inkubují 30 min s konjugátem: ALP a kozí protilátky vůči lidskému IgG nebo ALP a kozí protilátky vůči lidskému IgA nebo ALP a kozí protilátky vůči lidskému IgM. Po vymytí (3x5 min promývacím TRIS pufrem) nenavázaných konjugátů se k vybarvení použije bezbarvá směs 5-brom-4-chlor-3-indolylfosfátu a nitro-tetrazoliové modře (10 min). Činidlo se vymyje 3x destilovanou vodou a vyhodnocení proužků na přítomnost IgG nebo IgA nebo IgM protilátek vůči Yersinia enterocolitica se provádí vizuálně. Analytická senzitivita: > 99,9 pro IgG, 93,8 % pro IgA, 92,2 % pro IgM protilátky vůči Yersinia enterocolitica.Analytická specifita: 88,2 % pro IgG, 89,4 % pro IgA, > 99,9 % pro IgMprotilátky vůči Yersinia enterocolitica.

V dostupné literatuře nejsou uvedené.