|
Popis vyšetření: 17-KETOSTEROIDY
Dodavatelé reagencií k vyšetření:
Zařezeno v kategoriích: Synonyma:
17-KS; 17-ketosteroids, 17-oxosteroids, ketosteroids. Preanalytická fáze:
Stanovení se provádí ze sběru moče za 24 h (stabilizace HCl, CH3COOH, H3BO3). Moč se uchovává v chladu. Před sběrem je třeba vyloučit léky uvedené v odstavci interference. Stabilita po okyselení je 4 h při 20 – 25 °C, 2 týdny při 4 – 8 °C, 1 měsíc při -20 °C. Poznámky k analytické metodě:
Klasický postup sestává ze tří kroků: hydrolýzy konjugovaných steroidů, extrakce a separace androgenních steroidů, provedení Zimmermanovy reakce. Hydrolýza se provádí varem s15 % HCl po dobu 10 min. Extrakci je nejlépe provést do éteru. Neutrální 17-KS se oddělí protřepáváním 1x nasyceným roztokem NaHCO3, 2x 15 % roztokem KOH a 1x vodou. Éter se odpaří a odparek se rozpustí v 96 % etanolu. Zimmermanova reakce se provede s 5 M KOH (105 min). Růžové zbarvení se extrahuje do chloroformu a měří do 10 min při 450 nm. Lze použít také alkoholický roztok KOH s m-dinitrobenzenem a nachově červený roztok měřit při 520 nm. Postup byl ještě vylepšen náhradou etanolu metanolem, čímž se podstatně snížila absorbance blanku (posun měření na 530 nm). ELISA – sendvičový postup používá mikrotitrační destičky s protilátkou vůči 17-KS. Do jamek se pipetuje standard nebo vzorek a po inkubaci (2 h, 37 °C) a trojnásobném propláchnutí se přidá biotinylovaná protilátka vůči 17-KS a opět se inkubuje (1 h, 37 °C). Po trojnásobném propláchnutí se přidá avidin s konjugovanou křenovou peroxidázou a opět se reakční směs nechá inkubovat (1 h, 37 °C). Po propláchnutí se přidá tetrametylbenzidin a probíhá barevná reakce (30 min ve tmě, 37 °C), která se zastaví stop činidlem (1 M H2SO4). Intenzita zbarvení se měří ihned při 450 ±2 nm a je přímo úměrná množství 17-KS ve vzorku. Rozsah měření na základě sedmibodové kalibrace je 270 – 17335 µmol/l. Analytická citlivost je 69 µmol/l. Preciznost v sérii je < 3,7 %, mezi sériemi < 6,8 %; zpětný výtěžek je 97 %. Významné interference:
Snížené hodnoty: dna, kouření, hypopituitarismus, hypotyreóza, Addisonova nemoc, myxedém, nefróza, obezita, ovariektomie, tyreotoxikóza, po menopauze; léky: ACTH, anabolika, androgeny, cefaloridin, cefalotin, dexametazon, digoxin, estrogeny, fenotiaziny, fenytoin, glukóza, chloromerodin, karbamazepin, kortikosteroidy, metyrapon, morfin, opiáty, perorální kontraceptiva, probenecid, promazin, propoxyfen, pyrazinamid, reserpin, salicyláty, tiazidová diuretika. Zvýšené hodnoty: hyperpituitarismus, hyperplazie nadledvin, Cushingův syndrom, těhotenství, obezita, kouření, cvičení, stres, aceton; léky: acetamonofen, ACTH, ampicilin, androgeny, antibiotika, danazol, dexametazon, erytromycin, etryptamin, fenazopyridin, fenotiaziny, glutetimid, gonadotropiny, chinidin, chloramfenikol, chlordiazepoxid, chlorpromazin, kloxacilin, kyselina askorbová, kyselina nalidixová, meprobamat, meticilin, metyprylon, metyrapon, morfin, oleandomycin, oxacilin, penicilin, piperidin, prochlorperazin, reserpin, sekobarbital, spironolakton, testosteron, toleandomycin. |