|
Popis vyšetření: NEOPTERIN
Zařezeno v kategoriích: Synonyma:
D-neopterin, D-erythroneopterin, 6-D-erythroneopterin; D-erythro-6-trihydroxypropylpterin, 6-(D-erythro-1,2,3-trihydroxypropyl)pterin, [S-(R*,S*)]-2-amino-6-(1,2,3-trihydroxypropyl)-1H-pteridin-4-on; neopterine, [S-(R*,S*)]-2-amino-6-(1,2,3-trihydroxypropyl)-1H-pteridin-4-one, [S-(R*,S*)]-2-amino-6-(1,2,3-trihydroxypropyl)-1H-pteridine-4-one Preanalytická fáze:
Stanovení se provádí v moči z 12h nebo 24h sběru nebo se používá první ranní moč. Moč nutno chránit před světlem ihned po odběru. Stabilita analytu v moči je 1 d při 20 – 25 °C, 5 d při 4 – 8 °C, 60 měsíců při -20 °C (zamrazený vzorek skladovat v alobalu). Stanovení lze také provádět v séru, plazmě (antikoagulans EDTA) a likvoru. Také tyto biologické materiály (včetně původní krve) nutno uchovávat ve tmě. Stabilita analytu v séru je 3 d při 20 – 25 °C, 7 d při 4 – 8 °C, > 6 měsíců při -20 °C (zamrazený vzorek skladovat v alobalu), při -70 °C 1 rok. Poznámky k analytické metodě:
RIA je kompetitivní postup, kdy vzorky a kalibrátory jsou protřepány s 125I-neopterinem a se specifickou protilátkou ve zkumavkách a pak inkubovány 1 h při laboratorní teplotě ve tmě. Přidá se promývací roztok a zkumavky třepou 10 min a centrifugují. Obsah zkumavek dekantuje a měří se radioaktivita gama-počítačem (1 min). Signál je nepřímo úměrný koncentraci neopterinu ve vzorku. Rozsah měření na základě sedmibodové kalibrace 3 – 729 nmol/l. Analytická citlivost je 0,8 nmol/l. ELISA na mikrotitračních destičkách je kompetitivní postup, který používá zakotvenou kozí protilátku vůči králičímu IgG a do jamek se přidává vzorek (moč se ředí 100x) nebo kalibrátor, neopterin značený POD a králičí protilátka proti neopterinu (polyklonální protilátka vůči neopterinu může také být zakotvená přímo v jamkách). Po inkubaci (90 min ve tmě, některé soupravy 2 h) a promytí 4x se přidá tetrametylbenzidin v pufru. Roztok se inkubuje 10 min (30 min) ve tmě, pak se pipetuje stop činidlo (1 M H2SO4). Absorbance při 450 nm se měří do 15 min a je nepřímo úměrná koncentraci neopterinu ve vzorku. Celý postup probíhá za laboratorní teploty. Na základě šestibodové (osmibodové) kalibrace je rozsah metody 0,7 – 111 (100) nmol/l. Analytická citlivost 0,7 nmol/l. Preciznost v sérii je 4,3 – 11,7 %, mezi sériemi 8,8 – 13,8 %; linearita ředění 87 – 120 %, zpětný výtěžek 81 – 116 %. Hemolýza, chylozita ani ikterus stanovení neruší. Křížová reaktivita 7,8-dihydroneopterin 2 %, ostatní < 0,44 %. HPLC-MS/MS se používá ke stanovení v plazmě. Na koloně C18 se používá gradient voda-metanol (s příměsí 0,002 % HCOOH) od 100:0 po 5:95. Tandemová MS používá kvadrupólový hmotnostní spektrometr s elektrosprejí -4300 V při 400 °C; původní ion m/z 265, produkt iontové přeměny m/z 192. Kalibrační křivka je lineární od 0,4 do 197 nmol/l. Preciznost v sérii i mezi sériemi je < 15 %. Významné interference:
Výsledky snižuje: působení světla, kouření, psychologický stres. Výsledky zvyšuje v séru: alkoholismus, vysoký věk, transplantace srdce, TNF-α. |