|
Popis vyšetření: CHOLINESTERÁZA
Zařezeno v kategoriích: Synonyma:
acylcholin acylhydrolasa, EC 3.1.1.8; stanovuje se v séru acetylcholin acetylhydrolasa, EC 3.1.1.7; nestanovuje se v séru Chemické názvosloví připouští u enzymů pouze koncovku –asa, progresivní pravopis a řada současných lékařských publikací uvádí koncovku –áza. V anglickém názvosloví EC je kmenový základ někdy (např. butyrylcholinesterase) spojený s názvem přenášené skupiny, jindy ale (např. butyrylcholine esterase) může být samostatně. Mezinárodně uznávaná zkratka enzymu 3.1.1.8 neexistuje, ale běžně se používá označení ChE (Google 50 400), případně BChE (Google 59 400). Pro enzym 3.1.1.7 se používá zkratka AChE (Google 76100), ale mezinárodně uznávaná zkratka rovněž není. Preanalytická fáze:
Náběr do skla nebo plastu, jako protisrážlivý prostředek se používá EDTA nebo heparin. Po náběru okamžitě centrifugovat a separovat. Stabilita: 8 hodin při 20 - 25 °C, 1 týden při 4 - 8 °C, 1 rok při -20 °C. Při podezření na intoxikaci organofosfáty vzorek po odběru transportovat v ledové tříšti. Vzorky u kterých se předpokládá, že by mohly obsahovat reverzibilní inhibitor je třeba transportovat a skladovat na ledu a analyzovat co nejdříve, abychom zabránili destrukci enzymu inhibitorem in vitro. Doba inkubace po naředění vzorku činidlem by měla být co nejkratší, abychom omezili reaktivaci enzymu během analýzy. Pokud se provádí kvalitativní stanovení v plodové vodě (elektroforéza) je třeba vzorky před analýzou skladovat při -70° C. Poznámky k analytické metodě:
Nejvíce se používají spektrofotometrické metody s propionylthiocholinem nebo acetylthiocholinem jako substráty. Uvolněný thiocholin se váže na 5,5´-dithiobis(2-nitro-benzoovou kyselinu) (DTNB) a žlutý adukt se měří E.P. nebo kinetiky při 410 nm. Celková doba analýzy je 10 min. Je-li použit propionylthiocholin jodid jako substrát, je nižší činidlový blank a aktivita při 37 °C o 27% vyšší, než v případě butyrylthiocholin jodidu. Uvádí se také lepší rozlišení mezi jednotlivými fenotypy cholinesterázy a reprodukovatelnost mezi sériemi 3 %. V plodové vodě se sleduje pravá cholinesteráza EC 3.1.1.7 kvalitativně nebo kvantitativně s využitím inhibitoru 1,5-bis(4-allyldimetylamoniumfenyl)pentan-3-on dibromidu (BW 284C51). Kvalitativní důkaz lze provést elektroforézou v polyakrylamidovém gelu, kdy se rozdělí jednotlivé izoenzymy (v přítomnosti inhibitoru se pás izoenzymu EC 3.1.1.7. neobjeví). Významné interference:
Aktivita pseudocholinesterázy může být snížená u pacientů při podávání estrogenů nebo vlivem orálních kontraceptiv, awelysinu nebo cyklofosfamidu. |