Popis vyšetření: CHOLINESTERÁZA

Zařezeno v kategoriích:

Synonyma:

acylcholin acylhydrolasa, EC 3.1.1.8; stanovuje se v séru
pseudocholinesteráza; pseudocholinesterasa; cholinesterasa;  nespecifická cholinesterasa; cholinesterasa II (nespecifická);
BtChoEase; butyrylcholinesterasa; butyrylcholin esterasa;
propionylcholinesterasa;
benzoylcholinesterasa;
anticholinesterasa;

acetylcholin acetylhydrolasa, EC 3.1.1.7; nestanovuje se v séru
pravá cholinesteráza; pravá cholinesterasa; cholinesterasa; cholinesterasa I;
AcCholE; acetylcholinesterasa; acetyltiocholinesterasa; acetyl-β-metylcholinesterasa;
acetylcholinhydrolasa.

Chemické názvosloví připouští u enzymů pouze koncovku –asa, progresivní pravopis a řada současných lékařských publikací uvádí koncovku –áza. V anglickém názvosloví EC je kmenový základ někdy (např. butyrylcholinesterase) spojený s názvem přenášené skupiny, jindy ale (např. butyrylcholine esterase) může být samostatně. Mezinárodně uznávaná zkratka enzymu 3.1.1.8 neexistuje, ale běžně se používá označení ChE (Google 50 400), případně BChE (Google 59 400). Pro enzym 3.1.1.7 se používá zkratka AChE (Google 76100), ale mezinárodně uznávaná zkratka rovněž není.

Preanalytická fáze:

Náběr do skla nebo plastu, jako protisrážlivý prostředek se používá EDTA nebo heparin. Po náběru okamžitě centrifugovat a separovat. Stabilita: 8 hodin při 20 - 25 °C, 1 týden při 4 - 8 °C, 1 rok při -20 °C. Při podezření na intoxikaci organofosfáty vzorek po odběru transportovat v ledové tříšti. Vzorky u kterých se předpokládá, že by mohly obsahovat reverzibilní inhibitor je třeba transportovat a skladovat na ledu a analyzovat co nejdříve, abychom zabránili destrukci enzymu inhibitorem in vitro. Doba inkubace po naředění vzorku činidlem by měla být co nejkratší, abychom omezili reaktivaci enzymu během analýzy.
Hemolýza zvyšuje hodnoty pokud je použit jako substrát acetylcholin (současně s plazmatickou cholin-esterázou je stanovena acetylcholinesteráza přítomná původně v erytrocytech); při použití butyrylthiocholinového substrátu hemolýza nevadí. Mírná hemolýza neruší, jestliže je sérum dobře odstředěno, aby se odstranily erytrocyty. Lipémie nebo ikterus (bilirubin do 340 µmol/l) při stanovení neruší. Přítomnost oxalátů, fluoridů nebo citranů významně snižuje aktivitu cholinesterázy. Doporučuje se používat skleněné nádobky na reagencie, protože z některých plastových nádobek se mohou extrahovat inhibitory reakce.
Výsledky analýzy závisí také na věku a pohlaví pacienta a používání kontraceptiv. V těhotenství jsou přibližně
o 30 % nižší.

Pokud se provádí kvalitativní stanovení v plodové vodě (elektroforéza) je třeba vzorky před analýzou skladovat při -70° C.

Poznámky k analytické metodě:

Nejvíce se používají spektrofotometrické metody s propionylthiocholinem nebo acetylthiocholinem jako substráty. Uvolněný thiocholin se váže na 5,5´-dithiobis(2-nitro-benzoovou kyselinu) (DTNB) a žlutý adukt se měří E.P. nebo kinetiky při 410 nm. Celková doba analýzy je 10 min. Je-li použit propionylthiocholin jodid jako substrát, je nižší činidlový blank a aktivita při 37 °C o 27% vyšší, než v případě butyrylthiocholin jodidu. Uvádí se také lepší rozlišení mezi jednotlivými fenotypy cholinesterázy a reprodukovatelnost mezi sériemi 3 %.
Titrační metody sledují protony uvolněné z acetylcholinu: buď pomocí změny pH (60 – 90 min !) nebo změnou zbarvení fenolové červeně (30 min !). Elektrometrická titrace může být automatizovaná, kdy se k uvolňovaným protonům kontinuálně přidává báze, která je neutralizuje. Přístroj udržuje konstantní pH a spotřeba báze je přímo úměrná množství hydrolyzovaného acetylcholinu. Automatizované stanovení je rychlé (kinetická varianta) a CV je 4 – 5 %. Titrační metody jsou velmi citlivé na dodržování teploty a pH. 
Pokud se použije benzoylthiocholin jako substrát, je potřebné vybavení spektrofotometrem schopným měřit
ve střední UV oblasti (260 nm).
Certifikovaný referenční materiál není zatím dostupný. Toleranční limit EHK: 21 %.

V plodové vodě se sleduje pravá cholinesteráza EC 3.1.1.7 kvalitativně nebo kvantitativně s využitím inhibitoru 1,5-bis(4-allyldimetylamoniumfenyl)pentan-3-on dibromidu (BW 284C51). Kvalitativní důkaz lze provést elektroforézou v polyakrylamidovém gelu, kdy se rozdělí jednotlivé izoenzymy (v přítomnosti inhibitoru se pás izoenzymu EC 3.1.1.7. neobjeví).

Významné interference:

Aktivita pseudocholinesterázy může být snížená u pacientů při podávání estrogenů nebo vlivem orálních kontraceptiv, awelysinu nebo cyklofosfamidu.
Aktivitu pseudocholinesterázy zvyšuje: etanol.