IGFBP-6, Vazebný protein 6 růstového faktoru podobnému inzulinu, IBP6, IGF-Binding Protein 6, IGBP6, B15D4

Stanovení se provádí v séru nebo plazmě (antikoagulans heparin nebo EDTA), moči nebo supernatantu buněčné kultury. Zpracovat biologický materiál co nejrychleji. Pro pozdější použití lze jednorázově zamrazit na -20 (raději -70) °C. Pro analýzu lzepoužít i peritoneální dialyzát.

Kromě níže uvedených metod je popsána také imunoprecipitace (se Staphylococcus proteinem A + lidské antisérum vůči IGFBP6 + neiontový detergent Nonidet P40 v pufru TRIS) nebo ligandový blot (kdy po imunoprecipitaci IGFBP6 se specifickou protilátkou a separaci na 12 % SDS-PAGE dojde k blotu na nitrocelulózovou membránu napuštěnou ¹²⁵I-IGFI a ¹²⁵I-IGFII).

RIA používá polyklonální kozí protilátku vůči IGFBP6 vázanou na stěnu zkumavky, na kterou se váže v kompetitivní reakci IGFBP6 ze vzorku nebo IGFBP6 značený ¹²⁵I. RIA stanovení IGFBP6 probíhá v jednom kroku. Zkumavky se nechají inkubovat při 18 – 25 °C (třepání). Po inkubaci se obsah zkumavek odsaje, propláchne a odsaje. Vázaná aktivita ¹²⁵I se měří na gama-počítači 1 min. Koncentrace IGFBP6 v kalibrátorech a vzorcích je nepřímo úměrná změřené radioaktivitě. Kalibrační křivka se sestrojí na základě stanovení sérových kalibrátorů a hodnoty IGFBP6 přítomného ve vzorcích (např. syntetické peptidy se sekvencí aminokyselin 81-118 odpovídající IGFBP6) se odečtou z této křivky. Analytická citlivost je 1,1 µg/l. Preciznost v sérii 6,1 – 9,6 %, mezi sériemi 6,4 – 10,7 %.

ELISA je založena na sendvičovém principu, kdy na lidskou nebo monoklonální myší protilátku vůči IGFPB6 (vázanou na mikrotitrační destičce) se naváže IGFBP6 ze vzorku (150 min třepání). Po čtyřnásobném promytí se připojí k jinému místu IGFBP2 biotinylovaná kozí protilátka vůči lidskému IGFBP6 (60 min třepání).  Po čtyřnásobném promytí se přidá streptavidin konjugovaný s křenovou peroxidázou (45 min třepání). Po čtyřnásobném promytí se přidá substrát tetrametylbenzidin a barevná změna reakce s peroxidázou (30 min třepání ve tmě) se sleduje po zastavení stop činidlem (např. 0,2 M H₂SO₄) a protřepání fotometricky ihned při 450 nm. Analýza probíhá při laboratorní teplotě. Mez detekce: < 20 ng/l. Rozsah měření je na základě osmibodové kalibrace 0,15 – 60 µg/l (vyšší koncentrace se ředí diluentem 20 – 500x). Signál je přímo úměrný koncentraci IGFBP6 ve vzorku. Preciznost v sérii byla CV < 10 %, mezi sériemi < 12 %; zpětný výtěžek 71 – 90 %, linearita ředění 78 – 103 %.

V dostupné literatuře nejsou uvedené.