|
Popis vyšetření: ADENOVIRY
Zařezeno v kategoriích: Synonyma:
ADV Preanalytická fáze:
Průkaz se provádí v séru, nasofaryngeálním aspirátu, nasofaryngeálním výplachu, bronchoalveolární laváži nebo stolici. Stabilita v séru: 2 d při 4 – 8 °C, 14 d při -20 °C. Stabilita ve stolici: 2 h při 20 – 25 °C, 3 d při 4 – 8 °C, dlouhodobě po zmrazení. Poznámky k analytické metodě:
Jedná se o kvalitativní test. Nejlevnější je latexová aglutinace obvykle používaná pro stanovení ve stolici. Vzorek obsahující adenovirus způsobuje aglutinaci latexových částic pokrytých specifickou protilátkou. Aglutinace latexových částic odpovídá koncentraci adenoviru a může být měřena turbidimetricky při 540 nm. Imunofluorescenční test používá k detekci ve fluorescenčním mikroskopu vznik imunokomplexu s protilátkami značenými fluorescein izotiokyanátem (FITC). Tento postup se používá pro sérum a méně obvyklé materiály, jako jsou laváže, aspiráty a výplachy. ELISA (komerční soupravy). Mikrotitrační destičky jsou potažené příslušnou polyklonální protilátkou, na kterou se připojí antivirus ze supernatantu stolice (inkubace 20 min). Po trojnásobném promytí se přidá konjugát monoklonální protilátky vůči adenoviru s křenovou peroxidázou (inkubace 20 min – chránit před slunečním světlem). Po ukončení imunoreakce a trojnásobném promytí se přidá tetrametylbenzidin a barevná reakce (5 min) se zastaví stop činidlem a měří se do 30 min při 450 proti 620-650 nm. Celý postup probíhá za laboratorní teploty. Specifita testu je 99,8 %, citlivost 98 %. Jiná souprava ELISA je zaměřena na průkaz adenovirů v kultivačním médiu. V tomto případě je postup pomalejší. Úvodem se kultivační média vyklopí z jamek, které se inkubují 20 min metanolem. Po pětinásobném propláchnutí se provede blokace buněk 1 % hovězím albuminem ve fosfátovém pufru (1 h). Pak se inkubuje s první protilátkou 1 h (třepání). Po trojnásobném promytí se přidá konjugát druhé protilátky s POD, a opět se inkubuje 1 h (třepání). Po pětinásobném promytí se přidá tetrametylbenzidin a barevná reakce (5 – 10 min) se zastaví stop činidlem a měří se do 30 min při 450 nm. Významné interference:
Žádné interference nejsou v dostupné literatuře uvedené. |