Popis vyšetření: HELICOBACTER PYLORI

Zařezeno v kategoriích:

Synonyma:

H. pylori, Hp; Campylobacter pylori

Preanalytická fáze:

Test se provádí ve stolici nebo jako dechový test s vodíkem nebo 13C. Bioptický vzorek se odebírá do Stuartova média, kde je stabilní při 4 °C 24 h, nad 15 °C do 6 h.

Stolici je třeba umístit na suchou čistou podložku nebo papír. Stolice z toalety není vhodná na odběr. Konec tyčinky z odběrové zkumavky se ponoří do 3 různých částí stolice. Kouskem toaletního papíru nebo papírovým kapesníkem se utře konec tyčinky tak, aby zůstalo jen malé množství stolice v rýhách závitu. Na test postačí množství stolice zachycené v rýhách závitu. Tyčinka se zachycenou stolicí se ponoří do zkumavky, pevně zašroubuje a obsah zkumavky se promíchá silným třepáním (rozpuštěná stolice může být ve zkumavce uskladněná až 1 d v chladničce, zmrazená > 3 d).

Vhodným substrátem pro sledování koncentrace H2 je laktóza, sacharóza, sorbitol, fruktóza, glukóza nebo D-xylóza. Substráty se podávají perorálně v dávce 5 – 50 g.

Pro sledování poměru 13C/12C v oxidu uhličitém se nejvíce používá test s močovinou: pacient nesmí 2 h jíst, pít a kouřit; pak se odeberou 2 – 3 vzorky vydechovaného vzduchu do odběrové nádoby; podá se 200 ml kyseliny citronové nebo neslazeného pomerančového džusu a po 5 – 10 min 100 mg močoviny, značené 13C (dětem je podáváno poloviční množství). Podle účelu testu mohou být podávané místo močoviny jiné substráty značené 13C: cholesteryloktanoid, triolein, triacylglyceroly, amylóza, xylóza, laktóza, palmitát, acetát, aminopyrin, fenylalanin, metacetin, leucin, galaktóza nebo kofein.

Poznámky k analytické metodě:

Kvalitativní imunochromatografický test ve stolici. Test je vyroben tak, aby detekoval antigen Helicobacter pylori ve vzorku stolice a výsledek se dal jednoduše vizuálně interpretovat pomocí pásků na testovací destičce. Nakapou se 3 kapky do menší oválné jamky na testovací kazetě a čeká se na vznik barevné čáry (čar) v okénku. Výsledek je k dispozici 10 min po nakapání (odečítat nejpozději do 20 min). Hodnocení: pozitivní – dvě zřetelné čáry, negativní – jen jedna barevná čára v kontrolní oblasti, neplatný – neobjeví se žádná čára (je třeba zopakovat test s novou kazetou). Jestliže je výsledek negativní a symptomy infekce přetrvávají, je potřebné test opakovat 2 týdny po ukončení léčby.

ELISA používá mikrotitrační destičky s jamkami potaženými myší monoklonální protilátkou vůči Helicobacter pylori. Do jamek se pipetuje vzorek extrahované stolice a poté konjugát myší monoklonální protilátky vůči Helicobacter pylori a křenové peroxidázy. Po inkubaci (120 min, 37 °C) a pětinásobném promytí se přidá tetrametylbenzidin a barevná reakce (20 min, 18 – 24 °C, ve tmě) se zastaví stop činidlem (0,3 M H2SO4). Absorbance je přímo úměrná množství Helicobacter pylori ve vzorku a měří se do 20 min od přidání stop činidla. Rozsah čtyřbodové kalibrace umožňuje měření při 450/620-630 nm do 1 mg/l Helicobacter pylori.

Koncentrace vodíku ve vydechovaném vzduchu stoupá přímo úměrně k hydrolýze podaného substrátu. Vodík se stanovuje plynovou chromatografii nebo pomocí jednoduchých analyzátorů s elektrochemickým detektorem. Výsledky oběma postupy jsou srovnatelné.

Sledování 13C/12C v oxidu uhličitém z vydechovaného vzduchu po podání substrátu. Přístroje pro stanovení poměru koncentrací uvedených izotopů uhlíku jsou založeny na dvou principech. Nejpřesnější metodou je hmotnostní spektrometrie poměrů izotopů, kde hmotnostní spektrometr má speciální trojitý detektor počítající částice 44 (12CO2), 45 (13CO2) a 46 (12C16/8O2). Jednoduší postup využívá detekce v infračerveném spektru. IR analyzátory mají nižší citlivost a je vyžadován objem vzduchu 10 – 100 ml (sáčky z hliníkové fólie). Dosahovaná přesnost analýzy je 4,9 %. Pro POCT se také používá molekulární srovnávací spektroskopie, kdy se měření provádí v reálném čase zavedenou nosní sondou dvěma IR zdroji. Existuje také systém optogalvanického měření vlastností laserového paprsku.

Významné interference:

Antibiotika, antagonisté H2 receptorů a vizmutové přípravky inhibují Helicobacter pylori. Negativní výsledky získané během nebo krátce po léčbě, nemusí být spolehlivé z důvodu příliš nízkého počtu bakterií.