|
Popis vyšetření: gama-GLUTAMYLTRANSFERÁZA
Zařezeno v kategoriích: Synonyma:
(5-L-glutamyl)-peptid:aminokyselina 5-glutamyltransferasa, EC 2.3.2.2; GGT; γ-GT; L-glutamyltransferasa; L-γ-glutamyltransferasa; γ-GPT; γ-glutamylpeptidyltransferasa; γ-GTP; glutamyltranspeptidasa; α-glutamyltranspeptidasa; γ-glutamyltranspeptidasa; γ-glutamyltranspeptidasa; L-γ-glutamyltranspeptidasa. Chemické názvosloví připouští u enzymů pouze koncovku –asa, progresivní pravopis a řada současných lékařských publikací uvádí koncovku –áza. Prof. Kodíček uvádí celý název jako jedno slovo, v anglickém názvosloví EC je kmenový základ někdy (např. transferase) spojený s názvem přenášené skupiny, jindy ale (např. transpeptidase) může být samostatně. Preanalytická fáze:
Stabilita 20 až 25 °C 3 dny (sérum), 3 dny (plazma – nepoužívat jiné antikoagulans než heparinát lithný), 4 až 8 °C 7 dní, –20 °C alespoň 2 měsíce. Nicméně EDTA při stanovení v plazmě neruší, protože doporučená metoda nepoužívá hořečnaté ionty, které by mohly být maskovány uvedeným chelátem. Stanovení ruší fluorid sodný, oxalát a citran, které při koncentraci 1 g/l inhibují aktivitu GGT přibližně o 15 %. Také lipémie a ikterus mohou aktivitu GGT snižovat. Jedinci s nadváhou ≥ 30 % vykazují zvýšenou katalytickou koncentraci GGT. Ruší silná hemolýza. Slabá hemolýza nezpůsobuje znatelnou změnu měřené aktivity GGT. Poznámky k analytické metodě:
Nečistoty ze syntézy L-γ-glutamyl-3-karboxy-4-nitroanilidu (přípustná kontaminace je 0,5 %) nebo glycylglycinu (přípustná kontaminace je 0,1 %) mohou inhibovat analytické stanovení katalytické koncentrace GGT. Nekarboxylovaný substrát je sice o 19 % citlivější než karboxylovaný, ale vzhledem ke své omezené rozpustnosti je nutné používat přesycený roztok, který je stabilní jen po několik hodin. Dobře rozpustný L-γ-glutamyl-3-karboxy-4-nitroanilid nepodléhá hydrolýze. Při jeho koncentraci 10 až 12 mmol/l nedochází k inhibici enzymové reakce. Používané substráty jsou bezbarvé a sleduje se vzrůst absorbance po odbourání glutamylové skupiny pomocí GGT.
Maximální aktivity GGT je dosaženo za těchto podmínek: pH 7,8 až 8,5; glycylglycin 129 až 250 mmol/l; γ-L-glutamyl-3-karboxy-4-nitroanilid 6,6 až 10,2 mmol/l; poměr sérum-činidlo 1:11; pufr Tris-HCl 100 mmol/l.
Při použití delší vlnové délky měření ( > 410 nm) se snižuje absorbance blanku.
Doporučená metoda ae už v jednočinidlové (A) nebo dvoučinidlové (B) variantě je v plném rozsahu obtížně aplikovatelná zvláště u rychlých analyzátorů s velmi malým měřícím objemem. Současné citlivé analyzátory dovolují zkrátit měření ze 3 min na 1 min a tím zkrátit celkový čas na 5,5 min, což je akceptovatelné i pro rychlé analyzátory.
Doporučená délka optické dráhy kyvetou je 10 mm, některé analyzátory mají jen 7 mm. S tím se nedá nic dělat, ale je třeba si uvědomit, že citlivost měření se snižuje asi o jednu třetinu.
Poměr vzorku a reakční směsi 1:11, takže použijete-li sumárně 150 µl činidel je třeba dávkovat 15 µl vzorku. Doporučená metoda IFCC uvádí jako vzorek pouze sérum. Linearita metody je za těchto podmínek přibližně do 4,5 µkat/l.
Extrémně levné soupravy indikují nekvalitní γ-L-glutamyl-3-karboxy-4-nitroanilid. Specifickým inhibitorem je fluorid sodný, který ruší zejména v soupravách používajících Mg2+ aktivátory (v doporučených metodách A a B tyto aktivátory nejsou), kdy vzniká sraženina fluoridu hořečnatého.
Lipémie do 22,8 mmol/l triacylglyceridů neruší.
Certifikovaný referenční materiál není zatím dostupný.
Významné interference:
Žlučové kyseliny snižují aktivitu GGT a rovněž tak následující látky: azatioprin, klofibrát, konjugované estrogeny, metotrexát, ursodiol aj. Orální kontraceptiva zvyšují aktivitu GGT o 20% a zvláště velký vzrůst katalytické koncentrace GGT byl pozorován u antikonvulziv jako je fenytoin nebo fenobarbital a to na čtyřnásobek u dětí a dvojnásobek u dospělých. Zvýšená aktivita je také vyvolána následujícími látkami: acetaminofen (někdy je toxický i v nízkých dávkách), aminoglutetimid, awelysin, difenylhydantoin, esterifikované estrogeny, etanol, fenotiazin, interferon α-n3, karbamazepin, medroxyprogesteron, sodanton, spasmoveralgin, streptokináza, kyselina valproová aj. |