prostatický specifický antigen, celkový PSA, antigen PSA; prostate specific antigen, total PSA

EC 3.4.21.77, semenogelasa, α-seminoprotein, seminin, P-30 antigen, γ-seminoglykoprotein, γ-SM, lidský žlázový kalikrein, lidský kalikrein 3, hK3

Stanovení se provádí v séru, případně v plazmě (antikoagulant EDTA, heparin nebo citronan) a výjimečně také
v moči. Dává se přednost vyšetření nalačno.
Stabilita vzorku: 20 - 25 °C: 3 h plazma – 24 h sérum (7 dní ?), 2 - 8 °C: 5 – 14 dní, -20 °C: 1 měsíc plazma,
6 měsíců – 12 let sérum. Opakované zamrazení se nedoporučuje. Biologický poločas PSA je 2,2 – 3,2 dnů. Výsledky ovlivňuje věk a cirkadiánní rytmy.
Ultrasenzitivní test PSA měří hodnoty od 0,001 µg/l a může se kromě vyšetřování mužů po prostatektomii použít i u vyšetření žen s karcinomem prsu (pozor v těhotenství je fyziologicky zvýšený).

Typické pro stanovení PSA jsou neizotopové imunoanalýzy na principu EIA, FIA a LIA. Většina dostupných metod je obtížně navzájem porovnatelná, protože jejich výsledky závisí na použitých standardech, specifitě protilátek a čistotě antigenů, použitých pro výrobu protilátek. Pro výrobu monoklonální protilátkou definovaného vnitřního standardu PSA byla doporučena vysoce účinná imunoafinitní chromatografie.

Pro stanovení PSA byl popsán aglutinační test s protilátkou vůči PSA na latexových částicích.

Pro měření PSA byly také navrženy izoelektrická fokusace, imunodifuze, imunoelektroforéza a raketková imunoelektroforéza.

Později byly publikovány testy EIA ve standardním provedení nebo s dvou- a třímístným použitím enzymů na polystyrénových kuličkách.
ELISA používá mikrotitrační jamky potažené monoklonální protilátkou vůči PSA. Po přidání vzorku se pipetuje druhá monoklonální protilátka vůči PSA, značená křenovou peroxidázou a tetrametylbenzidin jako substrát. Reakce probíhá v kyselém prostředí a měří se absorbance při 450 nm. Preciznost metody v sérii je CV 2,5 – 4,05 %, mezi sériemi 4,0 – 4,5 %; výtěžnost 95 – 100 %. Efekt nadbytku antigenu nebyl pozorován do
10000 µg/l.
Jako marker lze použít také ALP, substrátem je pak 4-nitrofenylfosfát a detekci lze provádět při 405 – 450 nm.
Další enzymová imunoanalýza na sendvičovém principu používá jednokrokovou reakci, kdy je vzorek inkubován s oxidem chromičitým a konjugátem ß-galaktosidázy, které jsou potažené monoklonální protilátkou rozeznávající různé epitopy na PSA. Nenavázaný konjugát je odstraněn magnetickou separací. Sendvič oxid chromičitý-Ab1-PSA-Ab2-β-galaktosidáza s β-d-galaktopyranosidem chlorfenolové červeně. Hydrolýzou se uvolňuje chlorfenolová červeň a barevná změna při 577 nm je přímo úměrná koncentraci PSA ve vzorku. Lze měřit i bichromaticky s druhou vlnovou délkou 700 nm. Rozsah měření 0,13 – 100 µg/l (vyšší koncentrace nutno ředit). Povolená chyba metody CV 5,2 – 5,5 %. Reprodukovatelnost v sérii 1,9 – 4,8 % (při koncentraci 0,09 µg/l 15,6 %), celková reprodukovatelnost 3,2 – 6,7 % ( při koncentraci 0,09 µg/l 25,6 %). Efekt nadbytku antigenu se neprojevuje do 15000 µg/l. Výtěžnost metody je 96 – 103 %. Analytická citlivost je 0,05 µg/l, funkční citlivost je 0,13 µg/l.
Technologie IRMA používá dvě myší monoklonální protilátky proti odlišným epitopům molekuly PSA. Značkou je ¹²⁵I. Citlivost je 0,1 µg/l. Reprodukovatelnost metody je v sérii CV 2,5 – 3,3 %. Efekt nadbytku antigenu se projevuje při koncentraci vyšší než 5000 µg/l. Tuto interferenci může odstranit použití dvojstupňové namísto jednostupňové metody.
Je popsána také kompetitivní RIA metoda.
FIA používá magnetické nebo latexové mikrokuličky potažené monoklonální protilátkou vůči PSA, značkou je ALP a substrátem 4-metylumbelliferylfosfát. Fluorescence se měří při 448 nm (excitace při 365 nm). V případě použití magnetických mikrokuliček je citlivost metody 0,01 µg/l. Celková preciznost CV 3,5 – 4,0 %; výtěžnost 88,6 – 105,9 %.
V případě latexových kuliček se používá k jejich izolaci frita ze skleněných vláken. Reprodukovatelnost v sérii má CV 3,3 – 5,4 %, mezi sériemi 0 – 4,5 %, mezi dny 1,0 – 4,6 % a celkově 4,3 – 7,5 %; výtěžnost 96 – 102 %. Citlivost metody je 0,1 µg/l.
Chemiluminiscenční imunoanalýza v sendvičovém uspořádání používá polyklonální kozí protilátku značenou esterem akridinu a druhou protilátku, která je ukotvena na paramagnetických částicích. Luminiscence je nastartována alkalickým peroxidem vodíku a měří se při 400 nm. Metoda je použitelná bez ředění do 100 µg/l. Efekt nadbytku antigenu se projevuje při koncentraci 10000 µg/l. Analytická citlivost je 0,01 µg/l; výtěžnost 92,6 – 107,3 %. Preciznost v sérii CV 2,08 – 4,38 %, mezi sériemi 1,56 – 4,67 %, celkem 2,60 – 5,97 %.
Jestliže podobná imunoreakce probíhá na latexových kuličkách (CMIA) je preciznost CV < 5 %, linearita reakce do 100 µg/l, funkční citlivost 0,025 µg/l a analytická citlivost 0,001 µg/l.
LOCI technologie (Luminescent Oxygen Channeling Immunoassay) je homogenní sendvičová chemiluminiscenční imunoanalýza. První činidlo obsahuje latexovou kuličku potaženou monoklonální protilátkou proti PSA + chemiluminiscenčním barvivem a také volný fragment F(ab´)₂ monoklonální protilátky vůči PSA s biotinovou kotvou. Druhé činidlo obsahuje jinou latexovou kuličku potaženou streptavidinem
a fotosenzitivní barvivo. Vzorek se inkubuje s prvním činidlem a na kuličku s monoklonální protilátkou vůči PSA se naváže antigen PSA a na něj druhá protilátka s volnou biotinylovou kotvou (vytvoří se sendvič). Pak se přidá druhé činidlo a vytvoří se můstek streptavidin-biotin. Při iluminaci zářením 680 nm se z fotosenzitivního barviva druhé kuličky uvolní kyslík ve formě radikálu a difunduje do chemiluminiscenčního barviva první kuličky, kde vyvolá emisi světla 612 nm, která je přímo úměrná koncentraci PSA ve vzorku. Analytická citlivost je 0,008 µg/l, detekční limit 0,010 µg/l, funkční citlivost 0,033 µg/l. Opakovatelnost metody má CV 1,19 – 2,93 %, reprodukovatelnost mezi laboratořemi 2,31 – 5,18 %; výtěžnost 99 – 110 %. Vychýlení vlivem hemoglobinu
(5 g/l), bilirubinu (342 µmol/l) a triacylglycerolů (33,9 mmol/l) bylo < 10 %. Efekt nadbytku antigenu se neprojevil do 50000 µg/l.
LIA stanovení s využitím volného substrátu je založeno na sendvičové imunochemické reakci. PSA se
v prostředí pufrovaného roztoku jedním epitopem váže na polyklonální kozí protilátku imobilizovanou na polystyrénové kuličce a druhým epitopem reaguje s monoklonální myší protilátkou konjugovanou s alkalickou fosfatázou. Reakce probíhá 30 min při 37 °C. Po odstranění nezreagovaného materiálu odstředěním a promytí se přidá substrát adamantyldioxetanfenylfosfát, který hydrolyzuje stykem s alkalickou fosfatázou za vzniku nestabilního meziproduktu. Ten se ihned rozpadá za vzniku záření, které se detekuje luminometrem. Intenzita záření je přímo úměrná koncentraci PSA ve vyšetřovaném vzorku. Výsledky jsou stanoveny podle kalibrační křivky, která je pro přístroj specifická a je určena na základě dvoubodové kalibrace (v kvadrupletu) a vzorové křivky získané z čárového kódu činidla. Linearita metody je do 150 µg/l. Detekční limit: 0,04 µg/l (2 SD), citlivost: 0,04 µg/l (CV ≤ 20 %). Preciznost v sérii (2,8 µg/l): < 5,1 %, v čase (11,4 µg/l): < 5,4 %; výtěžnost: 91 - 108 %. Efekt nadbytku antigenu se neprojevuje do 22500 µg/l.
ALP může reagovat i s jiným luminiscenčním činidlem, např. Lumi-Phos 530. Takto lze dosáhnout analytické citlivosti až 0,008 µg/l. Preciznost metody má CV < 7 % a efekt nadbytku antigenu se neprojevuje do 50000 µg/l.
Elektrochemiluminiscence následuje po imunoreakci na sendvičovém principu, kdy se vzorek inkubuje
s biotinylovanou monoklonální protilátkou, specifickou vůči PSA a monoklonální protilátkou, specifickou vůči PSA značenou ruthéniovým komplexem a vzniká sendvičový imunokomplex. Přidají se mikročástice potažené streptavidinem, na který se naváže imunokomplex svou biotinylovou kotvou. Reakční směs se nasaje do měřící komůrky, kde se mikročástice zachytí magneticky na povrchu elektrody.Nenavázané látky se odstraní pomocí tripropylaminového činidla. Zavedení napětí na elektrodu vyvolá chemiluminiscenci, která se měří fotonásobičem. Výsledky jsou stanoveny na základě kalibrační křivky, která je pro přístroj specifická a je určena na základě dvoubodové kalibrace a vzorové křivky získané z čárového kódu činidla. Metoda je použitelná
v rozsahu 0,003 – 100 µg/l. Detekční limit je 0,003 µg/l, funkční citlivost 0,03 µg/l. Reprodukovatelnost v sérii CV 1,2 – 1,7 %, mezi sériemi 1,6 – 3, 7 %.

Řada firem také nabízí kvalitativní průkaz PSA jako domácí vyšetření. Analýza je na imunochromatografickém principu a nebývá blíže specifikována, ale obvykle je jako marker používáno koloidní zlato.

V roce 2000 byl představen WHO a NCCLS referenční standard obsahující 100 % volného PSA s kódem 96/686 a další standard obsahující 90 % PSA v komplexu s α₁- antichymotrypsinem a 10 % volného PSA
s kódem 96/700.

Data z USA 2001 uvádějí preciznost 4 – 8 % při koncentraci 10 µg/l. Kritéria CLIA-88 pro přesnost uvnitř skupiny jsou ± 0,2 µg/l. Intraindividuální variace je 14 %, analytická preciznost by vzhledem k biologické variaci měla být ≤ 7 %.
Toleranční limit EHK: 15 %.

Přítomnost heterofilních protilátek nebo nespecifických vazeb může zapříčinit jak falešně nižší, tak falešně vyšší výsledky.
Koncentrace PSA je zvýšena: masáž prostaty, obstrukce moče, ultrazvuk prostaty, tělesná zátěž (zejména jízda na kole), při zácpě.