|
Popis vyšetření: Protilátky vůči CHLAMYDIA PNEUMONIAE - IgM
Zařezeno v kategoriích: Synonyma:
chlamydia pneumoniae antibodies IgM Preanalytická fáze:
Sérum je stabilní 1 d za laboratorní teploty, 7 d při 2 – 8 °C, 1 rok při -20 °C. Poznámky k analytické metodě:
ELISA probíhá tak, že protilátky specifické vůči chlamydiím obsažené v testovaném vzorku se vážou na purifikovaný antigen Chlamydia pneumoniae v reakčních jamkách testovací destičky (inkubace 60 min jiná metoda 30 min při 37 °C). Po promytí (3x) se konjugát kozí protilátky vůči lidskému IgM s křenovou peroxidázou váže na protilátky vůči chlamydiím (inkubace 30 min při 20 – 25 °C). Po promytí (3x) probíhá rekce tetrametylbenzidinu s enzymovou částí konjugátu. Tato reakce je po 15 min ve tmě (při 20 – 25 °C) zastavena přidáním zastavovacího roztoku (0,2 M H2SO4). Žluté zbarvení, které vzniká, se hodnotí fotometricky při 450/650 nm do 30 min. Množství navázaného konjugátu, a tedy rovněž intenzita barvy v jamkách, jsou přímo úměrné koncentraci protilátek ve vzorku. Průměrná hodnota kalibrátoru v dubletu je cutoff. Výsledky s absorbancí < cutoff – 15 % jsou negativní, cutoff – 15 % až < cutoff + 15 % jsou neurčité a ≥ cutoff + 15 % jsou pozitivní. Preciznost v sérii je 4,0 – 12,1 %, mezi sériemi 8,3 %. Relativní senzitivita je 83,3 %, relativní specifita > 95 %. Hemolytické, lipemické nebo ikterické sérum nemá žádný vliv při koncentraci hemoglobinu 10 g/l, triacylglycerolů 5,65 mmol/l a bilirubinu 342 µmol/l. ELISA může také používat v konjugátu kozí polyklonální protilátky proti lidským imunoglobulinům (G, A, M) označené ALP. V tom případě se používá jako substrát p-nitrofenylfosfát a stop činidlo je 1,2 M NaOH. Inkubace jsou 60 + 30 + 30 min při 37 °C, mezi inkubacemi promývání 4x a měření při 405/620-690 nm do 1 h. Nepřímá fluorescence je mikroskopická metoda. Fluorescenční imunoanalýza používá 3x7 jamek potažených antigeny C. pneumoniae, C. trachomatis, a C. psittaci. Po pipetování vzorku obsahujícího protilátky vůči chlamydiím proběhne první inkubace 30 min při 37 °C. Po promytí probíhá 30 min při 37 °C reakce s konjugátem, tj. králičí protilátkou (specifická k µ-řetězci) vůči lidskému IgM značenou fluorescein izotiokyanátem. Pak probíhá odečítání ve fluorescenčním mikroskopu. Významné interference:
Falešná negativita: při účinné léčbě (chinolóny, Azitromycin, Josamycin, aj.), chybně připravené vzorky. Falešná pozitivita: křížová reaktivita (Acinobacter species, Neisseria gonorrhoeae, streptokoky skupiny B). |