Popis vyšetření: KREATINKINÁZA

Zařezeno v kategoriích:

Synonyma:

ATP:kreatin N-fosfotransferasa, EC 2.7.3.2;
CK; kreatinkináza; kreatinkinasa; kreatinfosfokináza; kreatinfosfokinasa; fosfokreatinkinasa;
kreatinfosfotransferasa; ATP:kreatinfosfotransferasa;
adenosintrifosfát-kreatintransfosforylasa.

Chemické názvosloví připouští u enzymů pouze koncovku –asa, progresivní pravopis a řada současných lékařských publikací uvádí koncovku –áza. Prof. Kodíček uvádí celý název jako jedno slovo, v anglickém názvosloví EC je kmenový základ (např. kinase) vždy samostatně.

Preanalytická fáze:

Centrifugovat do 30 min od odběru. Stabilita 20 až 25 °C 2 dny (sérum), 7 dní (plazma – nepoužívat jiné antikoagulans než heparin), 4 až 8 °C 7 dní, –20 °C 4 týdny. Doporučuje se skladování ve tmě. Stanovení lze provádět i CSF a amniotické tekutině.
Fyzická zátěž hodnoty zvyšuje. Neodebírejte po chirurgických výkonech, defibrilacích nebo opakovaných intramuskulárních injekcích.
Ruší silná hemolýza (aktivita CK v erytrocytech je 0,2 µkat/l v 1 g henoglobinu). Slabá hemolýza (hemoglobin 0,32 g/l) nezpůsobuje znatelnou změnu měřené aktivity CK. Všechna antikoagulancia schopna tvořit cheláty inhibují aktivitu CK, neboe maskují hořečnaté ionty aktivující CK. Pro delší skladování séra se doporučuje přidání tiolů, neboe redukují sulfhydrylové skupiny CK a obnovují její aktivitu. Nejefektivnější tioly jsou kapaliny
2-tioglycerol a 2-merkaptoetanol (obě látky po 6 h skladování se vzorkem při 37 °C gelovatí a způsobují zákal). Nejčastěji se ale používá N-acetylcystein, protože může být dodáván jako krystalická substance. Snížení aktivity CK může způsobit denní světlo a také skladování při teplotách < 4 °C.
Ze tří cytoplasmatických izoenzymů CK je nejméně stabilní CK-BB. Stabilizace uvedeného izoenzymu se docílí přidáním tiolu, např. 2-merkaptoetanolu. Stabilita CK při skladování závisí také na pH séra.

Poznámky k analytické metodě:

Doporučená metoda IFCC (ECCLS) je v plném rozsahu obtížně aplikovatelná zvláště u rychlých analyzátorů
s velmi malým měřícím objemem.
Metoda musí být dvoučinidlová. Druhé činidlo je pouze kreatinfosfát.
Doporučovaná inkubace s prvním čidlem 3 min při 37 °C je dostatečně dlouhá pro reaktivaci CK pomocí
N-acetyl-L-cysteinu. Po přidání druhého činidla (startér) probíhá inkubace 2 min avšak nejméně 20 s
a následné měření 2 min. V doporučení se uvádí, že celková doba měření od přidání druhého činidla má být
3 min.
Většina analyzátorů neumožňuje dostatečně dlouhý reakční čas. Nicméně doporučujeme co nejméně zkracovat inkubaci s prvním činidlem. Dostačující fáze prodlevy po přidání druhého činidla je 20 s, pro měření
2 min (minimálně 6 bodů). Doporučená aktivita HK je 66,7 µkat/l a GPD 46,7 µkat/l. Jednotlivé optimalizované metody  se liší výběrem pufru, zdrojem GPD a typem pyridinového nukleotidu. I když se imidazolacetát jeví jako nejlepší pufr, nejvyšší aktivita CK byla dosažena bis-tris propanovém pufru [1,3-bis(tris(hydroxymetyl)-metylamino)propan], který má pKa 6,5. GPD se obvykle získává z pekařských kvasnic (nutno použít NADP+) nebo z bakterie Leuconostoc mesenteroides (lze použít jak NADP+, tak i levnější NAD+). Analytické limity metody jsou dány aktivitou GPD a koncentrací pyridinových nukleotidů a ADP.
Doporučená délka optické dráhy kyvetou je 10 mm, některé analyzátory mají jen 7 mm. S tím se nedá nic dělat, ale je třeba si uvědomit, že citlivost měření se snižuje asi o jednu třetinu.
Poměr vzorku a reakční směsi 1:23, takže použijete-li sumárně 165 µl činidel je třeba dávkovat 8 µl vzorku. Linearita metody je za těchto podmínek přibližně do 25 µkat/l.
Hlavním interferentem při reakci je adenylátkináza (synonymum myokináza), která se hojně vyskytuje
v erytrocytech. Tento enzym katalyzuje konverzi dvou molekul ADP na ATP + AMP. Protože při stanovení aktivity CK sledujeme ATP vzniklý po defosforylací kreatinfosfátu, způsobuje adenylátkináza falešně vysoké výsledky měření. Aktivita adenylátkinázy 10 µkat/l odpovídá aktivitě CK 1 µkat/l. Nejefektivnějším inhibitorem adenylátkinázy je směs 5 mmol/l AMP a 10 mmol/l diadenosin-5-pentafosfátu. Specifickým inhibitorem je i fluorid sodný, ale při vyšších koncentracích Mg2+ vzniká sraženina fluoridu hořečnatého.
Lipémie do 11,3 mmol/l triacylglyceridů neruší.
Certifikovaný referenční materiál není zatím dostupný.

Významné interference:

Snížené aktivity CK jsou u dobesilátu vápenatého, hydroxykobalaminu, kaptoprilu aj.
Řada látek způsobuje zvýšení aktivity CK: amfetamin, amfotericin B, amitriptylin, amoklen, ampicilin,
β-antagonisté, antihypelipidemika, barbituráty, cyclopropan, dalacin, danazol, dietyleter, dipidolor, dolsin, etanol, fenatyl, halofenát, haloperidol, halotan, heroin, chinidin, insulin, karbenoloxon, klofibrát, kyselina aminokapronová, labetalol, lidokain, morfin, D-penicilamin, perfenazin, pindolol, prochlorperazin, stanozolol, steroidy, sukcinylcholin, teofylin aj.