anti-sperm antibodies, anti-spermatozoa antibodies, sperm antibodies

Odebírá se venózní srážlivá krev. Sérum je stabilní při laboratorní teplotě 3 d, při 2 – 8 °C 7 d, při -20 °C 1 rok.

ELISA umožňuje in vitro kvantitativní vyšetření na protilátky vůči spermiím v séru. Reakční jamky mikrotitračních destiček jsou potažené směsí spermatických proteinů. V prvním kroku reakce jsou zředěné vzorky sér inkubovány v jamkách 60 min při 37 °C. V případě pozitivního vzorku se protilátky vůči spermiím váží na spermatické proteiny. Po promytí pufrem (3x) se k detekci navázaných protilátek provádí následně inkubace 60 min při 37 °C s enzymovým konjugátem (protilátka vůči lidským globulinům značená peroxidázou), který je schopen vyvolat barevnou reakci, následně po promytí pufrem (5x), s přidaným tetrametylbenzidinem a H₂O₂. Po 30 min se reakce zastaví 0,25 M H₂SO₄ a intenzita vzniklého zabarvení je přímo úměrná koncentraci protilátek vůči spermiím. Měření se provádí při 450/550 nm do 10 min na základě pětibodové kalibrace v rozsahu 0 – 250 kU/l. Přesnost v sérii 5,9 – 7,8 %, mezi sériemi 4,8 – 7,5 %. Senzitivita: > 95 %, specifita: > 95 %. Silná hemolýza a lipémie ruší analýzu.

Nepřímá imunofluorescence IgG Do jamek destiček byla pipetována analyzovaná séra a přidána k spermiím (2x promytým, resuspendovaným ve fyziologickém roztoku a po vysušení fixovaným v metanolu). Po inkubaci 1 h při 20 – 25 °C, vypláchnutí a promývání (2x) byl přidán konjugát fluorescein izotiokyanátu s protilátkou vůči lidským imunoglobulinům. Následovala další inkubace 30 min při 20 – 25 °C. Pak byly vzorky promyty (2x), překryty glycerolovým médiem s fosfátovým pufrem a analyzovány ve fluorescenčním mikroskopu. Vzorky se hodnotí buď na 1 až 4 kříže, nebo se provádí ředění v čtyřkové řadě (1:4 až 1:1024) a titr nepřímé fluorescence (excitace 488 nm, emise 530 nm) byla hodnota ředění, při které došlo k fluorescenci hodnocené na 1+.

Falešná pozitivita je při aglutinaci s jinými faktory než protilátkami.