MDA, propandial; malondialdehyde, malonaldehyde

IUPAC: malonaldehyd

Stanovení lze provádět v séru, moči nebo tkáňových homogenátech. Sérum se zpracuje bezprostředně po koagulaci krevních elementů nebo lze skladovat až 5 dnů při 4 °C. Pro delší skladování nutno zamrazit na -20 (1 měsíc) nebo -80 °C (2 měsíce). Centrifugovaná moč se zpracuje ihned nebo zamrazí na -20 nebo -80 °C. Tkáň se promyje fosfátovým pufrem, homogenizuje ve fosfátovém pufru a dvakrát zamrazí přes noc na -20 °C a opět rozmrazí. Po centrifugaci lze supernatant skladovat při -20 nebo -80 °C. Hemolýza ruší při stanovení.

Fotometrie se provádí po reakci s 0,8 % kyselinou tiobarbiturovou, kdy vzniká růžové zbarvení, při 520 nm. Kalibrace byla provedena do 33,1 µmol/l. Reakce není specifická a s tiobarbiturovou kyselinou vytvářejí růžové adukty i další látky.

Fluorimetrie sleduje adukt MDA s kyselinou tiobarbiturovou (excitace 520 nm, emise 549 nm). Kalibrační křivka 0,05 – 0,6 µmol/l MDA. Analytická citlivost 0,015 µmol/l, funkční citlivost 0,025 µmol/l. Preciznost v sérii je 3,7 %, mezi sériemi 8,4 %; zpětný výtěžek 93,0 – 101,6 %. Triacylglyceroly do 13,4 mmol/l neruší.

ELISA používá kompetitivní inhibici. Protilátka vůči MDA je ukotvená v jamkách mikrotitračních destiček. Vzorky byly pipetovány současně s konjugátem MDA a křenové peroxidázy; následně proběhla inkubace 1 h při 37 °C. Po odstranění volných reagencií promytím (3x) byl přidán tetrametylbenzidin s H₂O₂ a vybarvování bylo (po 15 min při 37 °C ve tmě) zastaveno stop činidlem. Výsledná absorbance (měřena do 10 min) při 450/600-630 nm je nepřímo úměrná množství MDA ve vzorku. Rozsah měření 1,38 – 555 µmol/l (při vyšších koncentracích lze vzorek naředit). Mez detekce je 0,56 µmol/l. Přesnost v sérii je < 6 %, mezi sériemi < 11 %.

Kapilární elektroforéza probíhá v nepotažené kapiláře 200 mm x 50 µm při 20 °C s použitím boraxu 25 mmol/l (pH 9,3) a tetradecyltrimetylamonium bromidu jako pufru. Aplikované napětí bylo 4000 V (při 8 µA) s UV detekcí při 260 nm a dobou analýzy vzorku 8 min. Před analýzou byly vzorky hydrolyzovány 1 h při 60 °C v roztoku NaOH 1 mmol/l. Mez detekce metody byla 0,4 µmol/l.

GC může pracovat buď s detektorem elektronového záchytu, nebo s hmotnostním detektorem. MDA se derivatizuje s 2,4,6-trichlorfenylhydrazinem a potom extrahuje do n-hexanu. Pro separaci se používá kolona OV-5 (280 °C, nosný plyn helium). Hmotnostní spektrometr používá ionizace elektronovým paprskem (70eV, 280 °C), který se manuálně naladí na perfluortributylamin m/z 69,2 a 502. Reprodukovatelnost v sérii je 3,3 %, mezi sériemi 3,9 %; zpětný výtěžek 96 %.

Izotopová diluce s GC-MS a dideuterovaným MDA 3-hydroxy[1,3-2H2]-2-propenal jako vnitřním standardem, je považována za referenční metodu. Sledovány jsou ionty m/z 144 a m/z 146. Kalibrace je v rozsahu 0,01 – 15 µmol/l MDA. Preciznost v sérii 2,0 %, mezi sériemi 2,1 %; zpětný výtěžek je 97,4 – 98,6 %.

HPLC malondialdehyd byl derivatizován kyselinou tiobarbiturovou (60 min, 95 °C) a adukt byl stanoven HPLC (kolona 125x4 mm, průtok 0,8-1,2 ml/min, 30 °C, doba analýzy 4 min) s fluorescenční detekcí (excitace 515 nm, emise 553 nm). Mobilní fází byla směs 25 mmol/l KH₂PO₄ a etanolu (80:20, v/v), pH 6,0. Analytické parametry metody byly uspokojivé. Přesnost v sérii 4,0 %, zpětný výtěžek 95,4 – 102,6 %. Kalibrační křivka byla lineární v celém rozsahu koncentrací použitých standardů MDA (0,1 – 100 µmol/l).

Snížené hodnoty: po hemodialýze.

Zvýšené hodnoty: diabetes mellitus, cerebrovaskulární chronické choroby, akutní infarkt myokardu, leukémie, Parkinsonova nemoc, akutní pankreatitida, preeklampsie, stres, těhotenství, urémie.