Popis vyšetření: AMIODARON

Zařezeno v kategoriích:

Synonyma:

2-butyl-3-benzofuranyl-4-[2-(diethylamino)ethoxy]-3,5-diiodofenylketon;

2-butyl-3-benzofuranyl)[4-[2-(diethylamino)ethoxy]-3,5-diiodofenyl]methanon;

Amiodaronum, Amiodarone, Amiodarona, Aminodarone, Amjodaronum, Aratac, Cordarone, Nexterone, Pacerone, Trangorex

Poznámka: obvykle je dostupný jako hydrochlorid

Preanalytická fáze:

Stanovení se provádí v séru nebo plazmě (antikoagulans heparin, EDTA, NaF, KF, oxalát). Ihned po separaci od krvinek je třeba materiál deproteinovat (do 4 h). Stabilita: při 20 – 25 °C 4 h; při 4 – 8 °C 1 d (sérum), 3 d (plazma); při -20 °C 3 d (sérum), 14 d (plazma). Jinde se uvádí, že i při -38 °C klesá koncentrace o 8 % za 24 h, o 16 % za 48 h, o 19 % za 72 h, o 23 % za 7 d, o 32 % za 14 d. Materiál je nutné chránit před světlem a nepoužívat odběrové zkumavky se separačními gely.

Poznámky k analytické metodě:

ELISA sendvičového typu na mikrotitračních destičkách má jamky potažené protilátkou vůči amiodaronu. Do jamek se pipetují standardy a vzorky a amiodaron se váže na zakotvenou protilátku. Po propláchnutí se přidá biotinylovaná druhá protilátka. Po inkubaci a promytí se přidá konjugát křenové peroxidázy s avidinem. Po inkubaci a promytí se přidá tetrametylbenzidin a nechá se proběhnout barevná reakce. Reakce se ukončí přidáním stop činidla. Intenzita zbarvení je přímo úměrná koncentraci amiodaronu. Rozsah metody je 1,56 – 100 µg/l, analytická citlivost 0,39 µg/l.

FPIA umožňovala rovněž toto stanovení s dobrými výsledky (např. přesnost v sérii 4,6 %), ale již není na trhu.

HPLC v izokratickém režimu umožňuje paralelní stanovení amiodaronu i jeho metabolitu N-desetylamiodaronu. Po extrakci do metylizobutyléteru lze stanovit amiodaron v rozsahu 0,3 – 6,0 mg/l. Při použití raketové kolony (Plantinum Cyano) se zkrátí eluční čas na polovinu, tj. 2,2 min. Mobilní fáze acetonitril/metanol/0,05M octan amonný v poměru 40:56:3. Vnitřní standard: 2-etyl-3-(3,5-dibrom-4-di-n-propylaminopropoxybenzoyl)benzotiofen. Detekce UV detektorem při 242 nm se provádí s precizností < 6 %, zpětný výtěžek 94 – 96 %.

HPLC-MS/MS stanovuje amiodaron i jeho metabolit po izotopové diluci tetradeuterovanými deriváty. Chromatografie probíhá v gradientu voda/metanol (+ příměsi) 2,5 – 100 %. Eluční čas je 4 min. Hmotnostní spektrometrie elektrosprejí je s pozitivní ionizací, napětí 450 V, zdrojová teplota 120 °C, desolvatace 450 °C. Sledují se přechody m/z 646,0 → 201,2 pro amiodaron a 650 → 201,2 pro D4-amiodaron, resp. 618,0 → 547,0 pro N-desetylamiodaron a 622,0 → 546,9 pro D4-N-desetylamiodaron. Rozsah metody je 0,01 – 40 mg/l. Preciznost v sérii 2,3 – 4,9 %, mezi sériemi 2,1 – 3,6 %; přesnost < 9 %; zpětný výtěžek 92,6 – 107,7 %.

Poločas vymizení amiodaronu je 250 – 1200 h.

Významné interference:

Hodnoty snižuje: pozdní zpracování, vliv světla, separační gely, evakuované heparinizované zkumavky.

Hodnoty zvyšuje: N-desetylamiodaron (ELISA).