IGFBP-3, Vazebný protein 3 růstového faktoru podobnému inzulinu

Stanovení se provádí v séru nebo plazmě. Sérum i plazma je stabilní při 15 – 25 °C i při 4 – 8 °C 5d, při -20 °C 1 měsíc. Opakované rozmražení je možné.

IRMA používá kozí polyklonální protilátku vůči IGFBP3 vázanou na stěnu zkumavky, na kterou se váže IGFBP3 ze vzorku a pak na něj kozí polyklonální protilátka vůči IGFBP3 značená ¹²⁵I. Imunoradiometrické stanovení IGFBP3 (vytvoření sendviče) probíhá v jednom kroku. Zkumavky se nechají inkubovat 18 – 24 h při 18 – 25 °C (třepání). Po inkubaci se obsah zkumavek odsaje a dvakrát propláchne a odsaje. Vázaná aktivita ¹²⁵I se měří na gama-počítači 1 min. Koncentrace IGFBP3 v kalibrátorech a vzorcích je přímo úměrná změřené radioaktivitě. Kalibrační křivka se sestrojí na základě stanovení šesti sérových kalibrátorů a hodnoty IGFBP3 přítomného ve vzorcích se odečtou z této křivky. Rozsah stanovení je 0,27 – 100 µg/l (vyšší koncentrace IGFBP3 se ředí diluentem, např. 100x). Analytická citlivost je 0,27 µg/l, funkční citlivost 0,31 µg/l. Preciznost v sérii ≤  4,4 %, mezi sériemi ≤  13,5 %; linearita ředění je 82,3 – 120 %, zpětný výtěžek 80,1 – 116 %. Hemolytická, ikterická a chylózní séra ruší při stanovení. Pacienti, kteří byli pravidelně ve styku se zvířaty nebo podstoupili imunoterapii nebo diagnostické procedury využívající imunoglobuliny nebo fragmenty imunoglobulinů, mohou produkovat protilátky, které interferují při imunologických stanoveních.

ELISA je založena na sendvičovém principu, kdy na protilátku vůči lidskému IGFPB3 (vázanou na mikrotitrační destičce) se naváže IGFBP3 ze vzorku (2,5 h třepání). Po čtyřnásobném promytí se připojí k jinému místu IGFBP3 biotinylovaná protilátka vůči lidskému IGFBP3 (1 h třepání). Po čtyřnásobném promytí se přidá streptavidin konjugovaný s křenovou peroxidázou (45 min třepání).  Po čtyřnásobném promytí se přidá substrát tetrametylbenzidin a barevná změna reakce s peroxidázou (30 min) se sleduje ihned po zastavení stop činidlem (např. 0,5 M H₂SO₄) a protřepání fotometricky při 450 nm. Analýza probíhá při laboratorní teplotě. Mez detekce: 0,08 µg/l. Rozsah měření je na základě sedmibodové kalibrace 0,08 – 18 µg/l (vyšší koncentrace se ředí diluentem 20x nebo 200x). Signál je přímo úměrný koncentraci IGFBP3 ve vzorku. Preciznost v sérii byla CV < 10 %, mezi sériemi < 12 %; zpětný výtěžek 85 – 105 %, linearita ředění 84 – 103 %.

Metoda CLIA je založena na sendvičové imunochemické reakci, kde je ALP jako marker. IGFBP3 se v prostředí pufrovaného roztoku s obsahem sérových bílkovin váže jedním epitopem na monoklonální myší protilátku vůči IGFBP3, imobilizovanou na polystyrenové kuličce a druhým epitopem na monoklonální myší protilátku vůči IGFBP3, konjugovanou s alkalickou fosfatázou. Reakce probíhá 30 min při 37 °C. Po odstranění nezreagovaného materiálu odstředěním a promytí se přidá substrát adamantyldioxetanfenylfosfát, který hydrolyzuje stykem s alkalickou fosfatázou za vzniku nestabilního meziproduktu. Ten se ihned rozpadá za vzniku záření, které se detekuje luminometrem. Intenzita záření je přímo úměrná koncentraci IGFBP3 ve vyšetřovaném vzorku. Výsledky jsou stanoveny podle kalibrační křivky, která je pro přístroj specifická a je určena na základě dvoubodové kalibrace (v kvadrupletu) a vzorové křivky získané z čárového kódu činidla. Linearita metody je 0,1 – 16 mg/l. Tato metoda je postavena o více než dva řády výše a proto není třeba vzorky ředit. Efekt nadbytku antigenu se neprojevuje do 426 mg/l. Detekční limit metody: 0,1 mg/l (2 SD). Preciznost v sérii: 3,5 – 5,6 %, celková: 7,5 – 9,9 %. Zpětný výtěžek:  85 – 103 %, linearita ředění 95 – 109 %. Hemoglobin do koncentrace 5,5 g/l ani triacylglyceroly do 33,9 mmol/l, bilirubin do koncentrace 342µmol/l neinterferují. Pacienti, kteří byli pravidelně ve styku se zvířaty nebo podstoupili imunoterapii nebo diagnostické procedury využívající imunoglobuliny nebo fragmenty imunoglobulinů, mohou produkovat protilátky, které interferují při imunologických stanoveních.

Mezinárodní standard: Insulin-Like Growth Factor Binding Protein-3 NIBSC 93/560, Version 4.0, 21/01/2008.

Toleranční limit EHK: 20 %.

Hodnotysnižuje: akromegalie.

Hodnoty zvyšuje: těhotenství (lineární vzestup mez 2. – 40. týdnem), podání růstového hormonu.