IGFBP-2, Vazebný protein 2 růstového faktoru podobnému inzulinu, IBP2, IGF-Binding Protein 2, IGF-BP53, BP2

Stanovení se provádí v séru nebo plazmě (antikoagulans heparin nebo EDTA), moči nebo supernatantu buněčné kultury. Lze provádět také analýzu v mateřském mléku, amniové tekutině, likvoru nebo slinách. Zpracovat biologický materiál co nejrychleji. Pro pozdější použití lze jednorázově zamrazit na -20 °C.

RIA používá polyklonální králičí (nebo lidskou) protilátku vůči IGFBP2 vázanou na stěnu zkumavky, na kterou se váže v kompetitivní reakci IGFBP2 ze vzorku nebo IGFBP2 značený ¹²⁵I. RIA stanovení IGFBP2 probíhá v jednom kroku. Zkumavky se nechají inkubovat při 18 – 25 °C (třepání). Po inkubaci se obsah zkumavek odsaje, propláchne a odsaje. Vázaná aktivita ¹²⁵I se měří na gama-počítači 1 min. Koncentrace IGFBP2 v kalibrátorech a vzorcích je nepřímo úměrná změřené radioaktivitě. Kalibrační křivka se sestrojí na základě stanovení sérových kalibrátorů a hodnoty IGFBP2 přítomného ve vzorcích se odečtou z této křivky. Analytická citlivost je 5 µg/l. Preciznost v sérii 4,7 – 7,2 %, mezi sériemi 4,5 – 7,4 %.

ELISA je založena na sendvičovém principu, kdy na lidskou nebo monoklonální myší protilátku vůči IGFPB2 (vázanou na mikrotitrační destičce) se naváže IGFBP2 ze vzorku (150 min třepání). Po čtyřnásobném promytí se připojí k jinému místu IGFBP2 biotinylovaná protilátka vůči lidskému IGFBP2 (60 min třepání).  Po čtyřnásobném promytí se přidá streptavidin konjugovaný s křenovou peroxidázou (45 min třepání). Po čtyřnásobném promytí se přidá substrát tetrametylbenzidin a barevná změna reakce s peroxidázou (30 min třepání ve tmě) se sleduje po zastavení stop činidlem (např. 1 M H₂SO₄) a protřepání fotometricky ihned při 450 nm. Analýza probíhá při laboratorní teplotě. Mez detekce: < 20 ng/l. Rozsah měření je na základě osmibodové kalibrace 20 – 6000 ng/l (vyšší koncentrace se ředí diluentem 200x nebo 2000x). Signál je přímo úměrný koncentraci IGFBP1 ve vzorku. Preciznost v sérii byla CV < 10 %, mezi sériemi < 12 %; zpětný výtěžek 84 – 103 %, linearita ředění 84 – 104 %. Interference bilirubinu a triacylglycerolů se neprojevuje.

Některé soupravy nepoužívají streptavidin-biotinovou kotvu, ale mají křenovou peroxidázu přímo konjugovanou na polyklonální protilátku vůči IGFBP2 (Inkubace: 120+60+30 min). Rozsah měření 40 – 20000 ng/l nebo dokonce 80000 ng/l.

Hodnoty snižuje: diurnální variace (minimum 6 h, maximum 20 h).

Hodnoty zvyšuje: hladovění, novorozenci (pupečníková krev), IGF-I.