Popis vyšetření: METAMFETAMIN

Zařezeno v kategoriích:

Synonyma:

Anadrex, deoxyefedrin, desoxyefedrin, Desoxyn, dextromethamfetamin, Madrine, metamfetamin hydrochlorid, Methampex, methamphetamine, Methedrine, metylamfetamin, N-metylamfetamin, Syndrox
N-methyl-1-fenylpropan-2-amin

applesauce, codswallop, crackpot, crank, crosspatch, crystal, doe, drinking glass, ecstasy, field glass, folderol, frappe, frosting, fruitcake, glass, glassful, grouch, grump, chalk, chicken feed, churl, ice, ice rink, ice-skating rink, icing, internal-combustion engine, looking glass, meth, nut, nut case, pervitin, rubbish, scrap, scratch, screwball, scum, shabu, sparkler, speed, starter spyglass, trash, tripe, trumpery, water ice, wish-wash, zip

Preanalytická fáze:

Stanovení se provádí obvykle v moči. Vzorky lze skladovat v lednici při 2 – 8 °C po dobu 5 týdnů. Při zamrazení na -20 °C je stabilita 1 měsíc, ale nedoporučuje se opakovaně vzorky zamrazovat. Biologický poločas je 10 – 30 h v závislosti na pH moče (alkalizace jej prodlužuje, okyselení zkracuje).

Poznámky k analytické metodě:

Imunochemické postupy jsou nejběžnější. Zejména jednoduché kvalitativní testy s jednoúčelovými proužky nebo pro multidrogový screening. Test prokazuje přítomnost drogy, tj. metadonu v moči. Konjugát (metamfetamin-protein) imobilizovaný v membráně testovací destičky soutěží kompetitivně s metamfetaminem přítomným v testované moči o možnost navázaní se na omezené množství koloidním zlatem značených protilátek nanesených na začátek testovací membrány. Barevné monoklonální protilátky proti metamfetaminu jsou spolu s močí posunovány po membráně. Pokud v moči metamfetamin není, dostanou se nenavázané protilátky až k pásu konjugátů v oblasti označené písmenem T (Test region) a vytvoří zde barevný pruh, což znamená negativní výsledek testu. Pokud je v moči metamfetamin přítomný, navážou se na ně protilátky hned na počátku membrány a k pásu konjugátů se již jako volné nedostanou. V oblasti označené písmenem T proto žádný barevný pás nevznikne, což znamená pozitivní výsledek testu. Podmínkou vydání kvalitativního výsledku testu (pozitivní nebo negativní) je přítomnost barevného kontrolního pruhu v oblasti membrány označené písmenem C (Control region). Ten vytvoří reakce jiného systému antigen/protilátka přidávaného výrobcem do setu. Kontrolní barevný pruh potvrzuje, že test byl proveden správně a že je funkční, tj. že bylo na testovací destičku naneseno dostatečné množství moče a že se moč dobře nasákla do celé plochy testovací membrány. Výhodná je také možnost poskytovaná některými výrobci a to skenování exponované destičky a uložení vytvořeného obrázku v elektronické formě, což umožňuje eventuální pozdější dokladování či jiné využití.
Pro kvantitativní stanovení se používá enzymová imunoanalýza (CEDIA cloned enzyme donor immunoassay, ELISA i EMIT) a fluorescenční homogenní polarizační technika FPIA, případně bioluminiscence. Obvyklé je kompetitivní uspořádání.
Homogenní imunoanalýza EMIT používá jako značku glukóza-6-fosfát dehydrogenázu, která pokud není
v imunokomplexu oxiduje glukóza-6-fosfát na glukonolakton-6-fosfát a současně redukuje NAD+ na NADH, což se sleduje při 340 nm. Metoda má reprodukovatelnost v sérii CV 0,47 – 0,53 %, mezi sériemi 1,48 – 1,60 %.
CEDIA je homogenní analýza, která využívá kompetice konjugátu metamfetaminu s malým štěpem
β-galaktozidázy a metamfetaminu ze vzorku o volná místa protilátky. Nespotřebovaný konjugát se opět spojí
s komplementárním velkým štěpem β-galaktozidázy na aktivní enzym, který štěpí o-nitrofenyl-β-galakto-pyranosid a hydrolýza se sleduje při 400 – 420 nm.
ELISA je založena na kompetitivní reakci mezi metamfetaminem ze vzorku a metamfetaminem značeným křenovou peroxidázou o vazebná místa protilátky, kterou jsou potaženy jamky mikrotitračních destiček. Po promytí se přidá tetrametylbenzidin a výsledné zbarvení se po zastavení reakce sleduje při 450 nm vertikální fotometrií. Mez detekce je 1 µg/l. Senzitivita je 97 %, specifita 100 %. Reprodukovatelnost v sérii CV 2,5 %
a mezi sériemi 3,7 %.
Homogenní fluorescenční FPIA stanovení lze provádět v koncentračním rozsahu 300 – 2000 µg/l
s reprodukovatelností v sérii CV 1,7 – 5,2 %, mezi dny 4,9 – 7,4 %. Mez stanovitelnosti je 300 µg/l.

Využívá se také řada chromatografických technik (GC, HPLC, TLC).
Referenční metodou je GC/MS s D5-metamfetaminem jako vnitřním standardem. Vzorky jsou oxidovány jodistanem a extrahovány do 1-chlorbutanu. Před nástřikem se provede extrakce do
4-karbetoxyhexafluorbutyrylchloridu. Rozsah měření 25 µg/l – 25 mg/l. Reprodukovatelnost v sérii CV < 2 %, mezi dny < 10 %.
HPLC se provádí na reverzní fázi kyselina fosforečná (pH 2,1) – acetonitril 9:1 při 40 °C. Dosažená reprodukovatelnost v sérii byla CV 0,84 – 2,63 %, mezi dny 1,92 – 5,11 %; vychýlení -0,72 % až +2,04 %. Linearita metody je v rozsahu 5 – 333 mg/l. Současně lze stanovit amfetamin a kofein. Mez detekce byla
0,5 mg/l, mez stanovitelnosti 1,5 mg/l.

Významné interference:

Výsledky stanovení metamfetaminu v moči zvyšují: alkalické pH, antialergika, benzfetamin, efedrin, fenetylamin, fenfluramin, fenmetrazin, fentermin, fenylpropanolamin, chlorpromazin, chlorochin, chinakrin, mefentermin,
N-acetylprokainamid, pseudoefedrin, ranitidin, tyramin, aj.