androst-4-en-3,17-dion, 4-androsten-3,17-dion, 3,17-dioxoandrost-4-en; 4-androstendion, Δ4-androstendion;

4-androstene-3,17-dione, 4-androstenedione, 4-androstendione;

Androtex, Fecundin, Vetranal.

Stanovení se provádí v séru nebo plazmě (antikoagulans EDTA, heparin), případně ve slinách. Výsledky s EDTA plazmou mohou být nižší než výsledky ze séra. Krvinky je třeba urychleně po centrifugaci odseparovat. Odběr 1 týden před nebo po menstruaci. Maximum 7 h ráno, minimu 16 h odpoledne (není po menopauze) – změna koncentrací je až dvojnásobná. Stabilita: 3 d při 20 až 25 °C (bez separace 2 h), 7 d při 4 až 8 °C (bez separace 2 d), 1 rok při -20 °C.

RIA předchází extrakce do éteru. Po protřepání se vodní fáze nechá vymrznout při -18 °C a éterový podíl se dekantuje a odpaří. Přidá se pufr s hovězím albuminem, promíchá se a vzorek se pipetuje do zkumavek pro RIA. (Jiná souprava umožňuje přímou analýzu bez extrakce). Uplatňuje se kompetitivní postup, kdy vzorky a kalibrátory jsou inkubovány 1 h (30 – 40 min) při 37 °C s ¹²⁵I-androstendionem ve zkumavkách potažených protilátkou vůči androstendionu. Po inkubaci se obsah zkumavek dekantuje a měří se radioaktivita gama-počítačem (1 min). Signál je nepřímo úměrný koncentraci androstendionu ve vzorku. Rozsah měření na základě šestibodové kalibrace 0,14 – 52,3 nmol/l, resp. 0,1 – 34,9 nmol/l (vyšší koncentrace lze ředit nulovým kalibrátorem). Analytická citlivost je 0,14 nmol/l (0,1 nmol/l). Preciznost v sérii je ≤ 8,1 (≤ 5,6) %, mezi sériemi ≤ 11,9 (≤ 9,8) %; linearita ředění 81 – 124 (80,2 – 119) %, zpětný výtěžek 82 – 106 (86,6 – 112) %. Při reakci mohou interferovat heterofilní protilátky.

ELISA na mikrotitračních destičkách je kompetitivní postup, který používá zakotvenou protilátku vůči androstendionu a do jamek se přidává vzorek nebo kalibrátor a androstendion značený POD. Po inkubaci (1 h, 37 °C) a promytí 3x fosfátovým pufrem se přidá tetrametylbenzidin s H₂O₂ v dimetylsulfoxidovém pufru. Roztok se inkubuje 15 min ve tmě, pak se pipetuje stop činidlo (0,15 M H₂SO₄). Absorbance při 450 nm a je nepřímo úměrná koncentraci androstendionu ve vzorku. Na základě šestibodové kalibrace je rozsah metody 0,33 – 34,9 nmol/l. Preciznost v sérii je ≤ 10,0 mezi sériemi ≤ 9,5 %. Křížová reaktivita ≤ 0,05 %. Jiná souprava umožňuje stanovení ve slinách v rozsahu 14,3 – 3490 pmol/l (mez detekce 14,3 pmol/l).

Chemiluminiscenční stanovení je založeno na kompetitivní imunochemické reakci. Androstendion v prostředí pufrovaného roztoku soutěží s androstendionem značeným ALP o vazebná místa na polyklonální králičí protilátce imobilizované na polystyrenové kuličce. Reakce probíhá 60 minut při 37 °C. Po odstranění nezreagovaného materiálu odstředěním a promytí se přidá substrát adamantyldioxetanfenylfosfát, který hydrolyzuje stykem s alkalickou fosfatázou za vzniku nestabilního meziproduktu. Ten se ihned rozpadá za vzniku záření, které se detekuje luminometrem. Intenzita vzniklého záření 425 – 500 nm je nepřímo úměrná koncentraci androstendionu ve vyšetřovaném vzorku. Výsledky jsou stanoveny podle kalibrační křivky, která je pro přístroj specifická a je určena na základě dvoubodové kalibrace (v kvadrupletu) a vzorové křivky získané z čárového kódu činidla. Rozsah měření je 1,04 - 35 nmol/l. Všechny vzorky, jejichž koncentrace by mohla být mimo kalibrační rozmezí, je třeba naředit. Analytická citlivost 1,04 nmol/l. Preciznost v sérii 6,2 – 15,1 % %, celková 8,5 % – 17,8 %; linearita ředění 93 – 113 %, zpětný výtěžek 88 – 108 %. Křížová reaktivita: andrenosteron 9,8 %, Δ4-androsten-11β-ol-3,17-dion 3,2 %, testosteron 1,4 %, ostatní < 0,59 %. Hemolýza a ikterus mohou způsobit zvýšení hodnot, lipémie naopak snížení výsledků. Při reakci mohou interferovat heterofilní protilátky.

LC-MS/MS Vzorky byly extrahovány do metyltetrabutyléteru a rozpouštědlo odpařeno pod dusíkem při 50 °C. Odparek byl rozpuštěn pro derivatizaci v hydroxylaminu a přidána směs metanol-voda (3:7) a reakce se nechala probíhat za třepání 15 min při 70 °C. Gradientová chromatografie používala různé složení metanol-voda-acetonitril-kyselina mravenčí. Hmotnostní spektrometr používal iontový sprej s napětím 3500 V a pro androstendion byl přenos kationtů m/z 317 → 124. Jako vnitřní standard byl použitý deuterovaný D₇-androstendion. Rozsah měření byl 0,02 – 157 nmol/l. Analytická citlivost byla 0,02 nmol.

Snížené hodnoty: skladování celé krve, po glukóze, menopauza, obezita, po porodu, nad 70 let; léky: karbamazepin, ketokonazol, norplant.

Zvýšené hodnoty: nádory produkující ACTH, osteoporóza u žen, Cushingův syndrom, cvičení, kouření, obezita, po jídle, těhotenství; léky: cimetidin, dehydroepiandrosteron, klomifen, metyrapon.