DHEA, didehydroepiandrosteron, dehydroisoandrosteron, androstenolon, prasteron; 

3β-hydroxyandrost-5-en-17-on, 5-androsten-3β-ol-17-on;

obchodní názvy: Ovigyn-d, Ovaflo, Fidelin, Ovomax

DHEAS je vylučován výhradně nadledvinami, proto je DHEA citlivějším ukazatelem metabolických poměrů v periferii. Stanovení se provádí v séru nebo plazmě (antikoagulans EDTA). Stabilita v séru při 18 – 25 °C 1 d, při 2 – 8 °C 7 d, při -20 °C 2 měsíce. Výsledky podléhají diurnální variabilitě s maximem v ranních hodinách. Ruší chylosní vzorky. Stanovené lze provádět i v moči. Opakované rozmrazování se nedoporučuje.

DHEA má 1000x nižší koncentraci než DHEAS. Proto analýze často předchází extrakce (dichlormetan nebo etylacetát) nebo chromatografie (Celit).

RIA Uplatňuje se kompetitivní postup, kdy vzorky a kalibrátory jsou smíchány s ¹²⁵I-DHEA a králičí protilátkou vůči DHEA a inkubovány 1 h (37 °C). Po inkubaci se přidá srážecí činidlo (kozí protilátka vůči králičímu IgG), inkubuje se 10 – 15 min (37 °C) a obsah zkumavek se centrifuguje. Po dekantaci se radioaktivita precipitátu měří gama-počítačem (1 min). Signál je nepřímo úměrný koncentraci DHEA ve vzorku. Rozsah měření na základě šestibodové kalibrace 0,2 – 103 pmol/l. Analytická citlivost je 0,2 nmol/l. Preciznost v sérii je ≤ 3,8 %, mezi sériemi ≤ 8,6 %; zpětný výtěžek 87 – 108 %; linearita ředění 81,4 – 109 %. Silná hemolýza, lipémie a ikterus ruší. Heterofilní protilátky mohou interferovat při stanovení.

ELISA na mikrotitračních destičkách je kompetitivní postup, který používá zakotvenou polyklonální protilátku vůči DHEA a do jamek se přidává vzorek nebo kalibrátor a DHEA značený POD. Po inkubaci (1 h, laboratorní teplota) a promytí 3x se přidá tetrametylbenzidin s H₂O₂. Roztok se inkubuje 15 min (laboratorní teplota), pak se pipetuje stop činidlo (0,5 M H₂SO₄). Absorbance při 450±10 nm se měří do 10 min a je nepřímo úměrná koncentraci DHEA ve vzorku. Na základě šestibodové kalibrace a čtyřparametrové logistické křivky je rozsah metody 0,37 – 104 nmol/l (vzorky s vyššími koncentracemi se ředí 10x nebo 100x). Analytická citlivost je 0,37 nmol/l. Preciznost v sérii je 3,84 – 6,92 %, mezi sériemi 3,75 – 9,96 %; zpětný výtěžek 94,1 – 114,3 %, linearita ředění 91,3 – 113,1 %. Hemolýza, lipémie a ikterus ruší.

Jiný typ ELISA má podobné uspořádání, ale jako marker DHEA slouží ALP. V tomto případě nelze použít plazmu s antikoagulantem EDTA (výrazně snižuje aktivitu ALP). Vzorky také nesmí obsahovat králičí IgG. Vzorky moče lze koncentrovat extrakcí do etylacetátu. Jamky mikrotitračních destiček jsou potaženy kozí protilátkou vůči králičímu IgG. Ke vzorku se přidává králičí polyklonální protilátka vůči DHEA a konjugát DHEA-ALP. Směs se inkubuje 2 h za laboratorní teploty a třepání. Pak se přidá 4-nitrofenylfosfát a inkubuje se 3 h při 37 °C. Poté se přidá stop činidlo (fosforečnan sodný) a ihned se měří při 405/570-590 nm. Signál je nepřímo úměrný koncentraci DHEA. Na základě sedmibodové kalibrace je rozsah metody 0,04 – 173,3 nmol/l (vzorky s vyššími koncentracemi se ředí 10x nebo 100x). Analytická citlivost je 0,01 nmol/l. Preciznost v sérii je 4,8 – 6,4 %, mezi sériemi 6,5 – 8,8 %; zpětný výtěžek 98,5 %. Křížová reakce: DHEAS 30 %, androstendion 0,72 %, androsteron 0,29 %, pregnenolon 0,28 %.

LC-MS/MS používá jako mobilní fázi A: 0,1 % kyselinu mravenčí ve vodě, B: metanol, C: aceton:acetonitril:izopropylalkohol (10:45:45). Retenční čas pro DHEAS je 0,9 min, pro DHEA 2,1 min. Hmotnostní spektrometr používá pozitivní iontové uspořádání a kolizním plynem je argon, pomocným plynem je dusík. Teplota v odpařovači je 382 °C, v kapiláře je 275 °C.  Rozsah měření DHEAS 0,033 – 17,097 µmol/l, DHEA 0,24 – 121 nmol/l. Preciznost v sérii pro DHEAS 4,6 %, pro DHEA 13,8 %; mezi sériemi pro DHEAS 7,1 – 8,3 %, pro DHEA 8,6 – 15,7 %. Jako vnitřní standardy se používaly hexadeuterované (2,2,3,4,4,6) DHEAS a (2,3,3,4,4,6) DHEA deriváty.

Závazný mezinárodní standard není uvedený, ale k dispozici jsou velmi kvalitní certifikované standardy.

Hodnoty snižuje: obezita, glukokortikoidy, androgeny, danazol, fenytoin, karbamazepin, ketokonazol, testosteron, interleukin-2, menopauza, gravidita, vyšší věk.

Hodnoty zvyšuje: ACTH, Cushingův syndrom, masivní hubnutí, klomifen, kortikotropin, u nedonošenců.