kyselina δ-aminolevulová, ALA

5-aminolevulinic acid, 5-aminolaevulinic acid, δ-aminolevulinic acid, dALA, δ-ALA, 5ala

systematický název: 5-amino-4-oxo-pentanová kyselina; 5-amino-4-oxo-pentanoic acid

Stanovení se provádí v moči sbírané 24 h a přechovávané při 2 – 8 °C. Kratší sběr jen v akutních případech. Moč je při 15 – 25 °C nestabilní (pokles na světle za 24 h o 50 %) – ale po úpravě pH (tymol nebo 0,3 % NaHCO₃) ve tmě je stabilní 1 – 4 d, při 4 °C a pH 5,5 – 7,0 (tymol nebo 0,3 % NaHCO₃) je stabilita 4 – 10 d, při -25 až -30 °C > 1 měsíc.

Fotometrie: ALA obsažená v moči kondenzuje zahříváním s acetylacetonem v acetátovém pufru (10 min na vroucí vodní lázni) na pyrrolový derivát. Ten po ochlazení poskytuje s p-dimetylbenzaldehydem v kyselém prostředí (98 % kyselina octová + 70 % kyselina chloristá) během 15 min barevný komplex, jehož absorbance při 553 nm je přímo úměrná koncentraci ALA v neznámém vzorku. Měření v rozsahu 19 – 381 µmol/l se provádí na základě jednobodové kalibrace v průběhu dalších 10 min. Mez stanovitelnosti je 2,4 mg/l. Preciznost v sérii je 2,55 %, mezidenní 2,16 %. Rozšířená standardní nejistota je 12 %.

Iontově-výměnná chromatografie: používá analyzátor aminokyselin. Pracuje se v pufru citrátu lithného na koloně 200x4,6 mm s průtokem 25 ml/h a tokem ninhydrinu 20 ml/h. Analýza vzorku trvá 59 min a ALA je eluována za 35 min. Kalibrace byla provedena sedmi kalibrátory 2,5 – 50 µmol/l a shoda s lineární regresní přímkou byla r² = 0,998. Preciznost v sérii byla 0,3 %.

HPLC: vzorek moče (50 µl) se přidal do roztoku acetylaceton-etanol-voda 15:10:75 (3,5 ml) a dále do 8 % formaldehydu (450 µl). Směs se vařila 15 min při 100 °C. Po ochlazení se provedla chromatografie na koloně 150x6 mm s reverzní fází oxidu křemičitého při teplotě 40 °C a průtoku 0,7 ml/min. Mobilní fází byl 50 % metanol s 0,1 % kyselinou octovou. Analýza trvala 16 min (retenční čas ALA je 6,1 min) a k detekci se použil fluorescenční detektor (excitace 373 nm, emise 463 nm). Kalibraci lze použít až do 762 µmol/l ALA.

Hodnoty snižuje: ponechání vzorku při laboratorní teplotě nebo na světle, alkoholické choroby jater; léky: cis-platina.

Hodnoty zvyšuje: těhotenství, hladovění, alkoholismus, hepatitida, nádory jater, dědičná tyrosinémie, amoniak, glukosamin, glycin, hexachlorbenzen, fenoly, halogenderiváty uhlovodíků, olovo, intoxikace železem; léky: anopyrin, barbituráty, deriváty pyrazolonu, diazepam, estrogeny, griseofulvin, hydantoináty, chloramfenikol, kyselina valproová, meprobamat, noxyron, penicilin, progesteron, radepur, rudotel, seduxen, sodanton, sulfonamidy, perorální antikoncepce.