Popis vyšetření: KANABINOIDY

Zařezeno v kategoriích:

Synonyma:

cannabis, THC, Δ9-trans-tetrahydrokanabinol, karboxytetrahydrokanabinol,
bhang, ganja, hašiš, konopí, marihuana

11-nor-9-karboxy-Δ9-tetrahydrokanabinol

Preanalytická fáze:

Stanovení v moči: uváděná stabilita při 20 – 25 °C je 10 týdnů, při 4 – 8 °C 1 rok. Při zamrazení na -20 °C je stabilita 1 rok.
Stanovení se provádí také v séru nebo plazmě (antikoagulanty EDTA nebo heparin). Stabilita: 20 – 25 °C
2 měsíce, při 4 – 8 °C 6 měsíců, při -20 °C 6 měsíců. Kanabinoidy jsou nestabilní v plastových nádobách. Stanovení se provádí i ve vlasech.
Výsledky mohou být pozitivní 2 až 5 dní po abstinenci u občasných kuřáků a 3 až 4 týdny po abstinenci
u chronických kuřáků.

Poznámky k analytické metodě:

Imunochemické metody měří nejen základní metabolit v moči 11-nor-Δ9-tetrahydrokanabinol-9-karboxylovou kyselinu (THC-COOH), ale také řadu dalších metabolitů a proto jsou jejich kvantitativní výsledky 1,5 až 8-krát vyšší, než je skutečná koncentrace THC-COOH stanovená GC-MS. Všechny nové metody jsou běžně porovnávány s GC-MS, ale její statut jako referenční metody nebyl dosud navržen.

RIA je založena na kompetitivní reakci mezi antigenem ze vzorku a antigenem značeným 125I o vazebná místa ovčí polyklonální protilátky. Po precipitaci, centrifugaci a dekantaci se měří gama-počítačem aktivita precipitátu. Reprodukovatelnost v sérii je 0,94 – 2,29 %, mezi sériemi 0,54 – 1,88 %. Mez detekce je 2,5 µg/l; výtěžnost 96 – 98 %.
ELISA je založena na kompetitivní reakci mezi antigenem ze vzorku a antigenem značeným křenovou peroxidázou (kaboxytetrahydrokanabinol) o vazebná místa polyklonální protilátky zakotvené na mikrotitračních destičkách. Volné antigeny se vymyjí a po přidání tetrametylbenzidinu se sleduje zbarvení při 450 nm proti
650 nm. Reprodukovatelnost v sérii 7,3 – 9,4 %. Mez detekce je 1 µg/l.
Soupravy EMIT jsou dostupné pro běžné analyzátory s reprodukovatelností v sérii 0,4 – 1,1 %. THC ze vzorku soutěží s THC značeným glukóza-6-fosfátdehydrogenázou o vazebná místa na protilátce. Volný konjugát pak redukuje NAD+ na NADH a pokles absorbance se sleduje fotometricky při 340 nm. Senzitivita analýzy je 97 %, specifita 98 %.
Fluorescenční homogenní polarizační technika FPIA používá kompetitivní princip. Vliv všech studovaných interferencí je < 10 %. Analytická reakce je srovnatelně citlivá pro: 11-Nor-Δ8-THC-9-karboxylovou kyselinu,
11-OH- Δ9-THC, 8-β-OH-Δ9-THC, 8-β-11-diOH-Δ9-THC a kanabinol. Mez detekce je 10 µg/l. Reprodukovatelnost v sérii 1,6 – 2,3 %, mezi sériemi 4,0 – 4,9 %. Výtěžnost je 94,0 – 108,2 %.
Kvalitativní postup: Konjugát (THC-protein) imobilizovaný v membráně testovací destičky soutěží s THC
v testované moči o možnost navázaní se na omezené množství zlatem značených protilátek nanesených na začátek testovací membrány. Barevné monoklonální protilátky anti-THC jsou spolu s močí posunovány po membráně. Pokud v moči THC není, dostanou se nenavázané protilátky až k pásu konjugátů ve sledované oblasti a vytvoří zde barevný pruh, což znamená negativní výsledek testu. Pokud je v moči THC přítomný, navážou se na něj barevné protilátky hned na počátku membrány a k pásu konjugátů se již nedostanou. Ve sledované oblasti proto žádný barevný pás nevznikne, což znamená pozitivní výsledek testu.

TLC – k dispozici je několik metod, ale nejlepšího rozlišení je dosaženo ve směsi hexan-diethylether 80:20, kdy lze rozlišit Δ8-THC, Δ9-THC, kanabinol a kanabidiol.
HPLC s detektorem diodového pole má velmi dobrou rozlišitelnost. Mobilní fází je metanol voda s postupně se zvyšujícím podílem metanolu. Metoda umožňuje stanovit 7 typů kanabinoidů s relativním vychýlením od -10,6 do +11,1 %. Reprodukovatelnost v sérii je od 1,01 do 6,28 % a mezi sériemi 1,93 až 10,94 %. Relativní rozšířená nejistota se pohybovala od 4,1 do 15,4 % pro jednotlivé hladiny a typy kanabinoidů.
GC-MS vyžaduje extrakci vzorku do acetonitrilu nebo nověji do β-cyklodextrinu v kopolymeru s epichlorhydrinem. Takto lze extrahovat Δ9-tetrahydrokanabinol, 11-hydroxy- Δ9-tetrahydrokanabinol a 11-nor-9-karboxy-Δ9-tetrahydrokanabinol. Reprodukovatelnost metody je 1,2 – 5,1 %, relativní vychýlení -7 až + 11 %, výtěžnost 85 – 102 %. Mez detekce je 0,2 µg/l.

Významné interference:

Výsledky stanovení kanabinoidů v moči snižují: chlornan sodný, kyselina octová, tekutá mýdla, aj.
Výsledky stanovení kanabinoidů v moči zvyšuje: glutaraldehyd.