GAST

Stanovení se provádí v séru nebo plazmě. Separaci od krevních buněk provést co nejdříve a vzorek ihned zmrazit. Sérum je třeba zpracovat do 4 h. Při 15 – 25 °C je pokles 6 % za 24 h, při 4 °C pokles o 50 % za 48 h (stabilní 4 h), při -20 °C 30 d. Variabilita hodnot gastrinu s maximem odpoledne a večer.

1 µg gastrinu = 0,9524 U, tedy 1 ng/l = 0,9524 mU/l. Gastrin má molekulovou hmotnost 2098, takže 1 ng/l = 0,4766 pmol/l; 1 mU/l = 0,5004 pmol/l; 1 pmol/l = 1,998 mU/l.

Většina imunoanalýz je specifická na C-terminální gastrin a reaguje stejně s G-34, G-17 a G-14.

RIA na kompetitivním principu používá imunoreakce mezi specifickou králičí protilátkou a gastrinem ze séra nebo kalibrátoru, který soutěží o vazebná místa protilátky s ¹²⁵I-gastrinem (např. 60 min, laboratorní teplota). Po přidání kozí protilátky vůči králičímu IgG (která se naváže na protilátku vůči gastrinu) s polyetylénglykolem se vytvoří sraženina (30 – 60 min, laboratorní teplota) a nenavázané frakce se oddělí centrifugací (15 min, 1700 g). Radioaktivita se může měřit gama-počítačem (1 min), buď v precipitátu (nepřímá úměra) nebo v supernatantu (přímá úměra). Analýza trvá celkem 2 – 4 h (podle výrobce). Kalibrátory (7 standardů) většinou používají syntetický lidský G-17 gastrin.Citlivost 5 pmol/l, rozsah 15,6 (11,9) – 500 (572) pmol/l. Mez detekce 2,1 pmol/l. Preciznost v sérii 2,2 – 3,0 %, mezi sériemi 4,0 – 7,5 %. Zpětný výtěžek 97,6 - 112 %, linearita ředění 82 – 112 %. Křížová reakce: gastrin-17-sulfát 83 %, gastrin-34 61 %, cholecystokinin-8 36 %. Ruší hemolýza, zákal, hyperlipémie, fibrin.

ELISA na kompetitivním principu používá mikrotitrační destičky s jamkami potaženými kozí protilátkou vůči králičímu IgG. Do jamek se přidají standardy nebo vzorky spolu s konjugátem gastrinu-1 s ALP a polyklonální králičí protilátkou vůči gastrinu. Po inkubaci (2 h, laboratorní teplota, třepání) se nevázané frakce 3x vymyjí a přidá se p-nitrofenylfosfát. Reakce (3 h, 37 °C) se zastavuje fosforečnanem sodným. Žluté zbarvení p-nitrofenolu se ihned odečítá při 405/570-590 nm a je nepřímo úměrné množství gastrinu-1, vázaného v jamkách. Pětibodová kalibrace je v intervalu 0 – 1191 pmol/l. Mez detekce je 3,46 pmol/l. Preciznost v sérii 3,7 – 8,8 %, mezi sériemi 3,4 – 6,5 %. Křížová reakce: gastrin-17-sulfát 9,3 %, cholecystokinin-8 2,67 %, gastrin tetrapeptid 1,6 %. Zpětný výtěžek 100,6 – 107,9 %. Chelatační činidla jako EDTA a EGTA vážou Mg²⁺ a Zn²⁺ a významně snižují aktivitu ALP.

Jiná ELISA na kompetitivním principu používá mikrotitrační destičky s jamkami potaženými kotvící protilátkou vůči králičímu IgG. Přidá se polyklonální králičí protilátka vůči gastrinu-1. Po inkubaci (90 min, laboratorní teplota, třepání) se jamky 4x promyjí. Přidá se standard nebo vzorek a biotinylovaný gastrin-1. Po inkubaci 150 min, laboratorní teplota, třepání) se jamky 4x promyjí. Přidá se konjugát streptavidinu s křenovou peroxidázou a inkubuje se 45 min (třepání). Jamky se 4x promyjí a přidá se tetrametylbenzidin a po 30 min ve tmě (laboratorní teplota, třepání) se reakce zastaví stop činidlem (0,2 M H₂SO₄) a absorbance se měří ihned při 450 nm. Šestibodová kalibrace je v intervalu 0,05 – 447 pmol/l. Mez detekce je 4,73 pmol/l. Preciznost v sérii < 10 %, mezi sériemi < 15 %.

Chemiluminiscence využívá sendvičový princip. Inkubace trvá 60 min při 37 °C; reakce probíhá mezi vzorkem pacienta, biotinylovanou  myší monoklonální protilátkou vůči gastrinu, králičí polyklonální protilátkou vůči gastrinu značenou ALP, myší monoklonální protilátkou vůči gastrinu značenou ALP a kuličkou potaženou streptavidinem (Pozn. Použití směsi dvou zvířecích protilátek jako druhé protilátky je velmi neobvyklé). Gastrin vytvoří sendvič s oběma značenými protilátkami (králičí i myší), který se na druhé straně přes biotin-streptavidinovou kotvu naváže na kuličku. Po odstranění nezreagovaného materiálu odstředěním a promytí se přidá substrát adamantyldioxetanfenylfosfát, který hydrolyzuje stykem s alkalickou fosfatázou za vzniku nestabilního meziproduktu. Ten se ihned rozpadá za vzniku záření, které se detekuje luminometrem. Intenzita záření 425 – 500 nm je přímo úměrná koncentraci gastrinu ve vyšetřovaném vzorku. Výsledky jsou stanoveny podle kalibrační křivky, která je pro přístroj specifická a je určena na základě dvoubodové kalibrace (v kvadrupletu) a vzorové křivky získané z čárového kódu činidla. Rozsah měření je 2,38 – 477 pmol/l. Analytická citlivost 2,38 pmol/l. Preciznost v sérii 3,2 – 6,2 % %, celková 4,7 % – 9,8 %; linearita ředění 97 – 129 %, zpětný výtěžek 102 – 127 %. Efekt nadbytku antigenu se neprojevuje do 107711 pmol/l gastrinu-17. Křížová reakce: gastrin-17-sulfát 111 %, gastrin-34 34 %, gastrin-34-sulfát 11 %, cerulein 2,5 %. Silná hemolýza (5,5 g/l), lipémie (11,3 mmol/l) a bilirubin (855 µmol/l) ruší. Při reakci mohou interferovat heterofilní protilátky.

Hodnoty snižuje: pozdní zpracování, opakované rozmrazení, glukagon, podání HCl p.o., gravidita (1. a 2. trimestr), transplantace ledviny, použití nevhodné protilátky při analýze, hypotyreóza, léky: H₂-blokátory (cimetidin, ranitidin), tricyklická antidepresiva, atropin, fenformin, lithium, okterotid, streptozocin.

Hodnoty zvyšuje: káva (2 – 5-krát), tělesné cvičení, masitá strava, gastroskopie, gravidita ve 3. trimestru, hemodialýza, cholecystokinin (někdy), feochromocytom, perniciosní anémie, renální selhání, hyperparatyreóza, hypochlorhydrie, achlorhydrie; léky: antacida, anticholinergika, antagonisté H₂-receptorů, inhibitory protonové pumpy, katecholaminy, chlorid vápenatý.