Total protein, celkový protein.

Zkratky CB nebo TP (uvedena v Lab Test Online) nejsou oficiálními zkratkami. Pojem plazmatické proteiny je zavádějící, protože zahrnuje i fibrinogen, který se v séru nestanovuje.

Množství stanovené bílkoviny dobře koreluje s hodnotami koncentrace proteinu v první ranní moči. Korekci
na vyloučený kreatinin lze doporučit, ale používá se málo (platí pouze při hodnotách kreatinémie pod 250 µmol/l). Vzhledem k tomu, že v první ranní moči (stagnací moči v močovém měchýři při tělesné teplotě a kyselém pH) se některé bílkoviny rozkládají, doporučuje se využít druhého mikčního vzorku.

Stabilita vzorku: 20 - 25 °C: 24 h, 4 - 8 °C: 1 týden, -20 °C: 1 měsíc. Skladování za laboratorní teploty vede
ke zvýšení o 10 % za tři dny. Sběr moče bez konzervačních přísad. Během sběru uchovávat při 4 – 8 °C. Před analýzou centrifugovat. Nejběžnější, ale také zejména v ambulantní praxi nejvíce chybami zatížený postup, je obvyklý sběr moči za 24 h. Až u 35-50 % pacientů nebývá dosaženo spolehlivého sběru. Přesto je při řádném poučení a spolupráci pacienta, uchování sbírané moči v chladu a včasném doručení celého objemu moči
do laboratoře vyjádření proteinurie/24 h (g/den) pro svou jednoduchost stále nejrozšířenější. Zamrazení moče snižuje hodnotu celkové bílkoviny. Okyselení 0,1 mol/l HCl denaturuje bílkoviny. Vyšší nadmořská výška vede ke zvýšení hodnot (snížení clearance kreatininu). Zvýšená hodnota může být při hemolýze, vlivem cvičení nebo také v premenstruační moči nebo v těhotenství.

Referenční metoda neexistuje. Americká společnost klinické chemie doporučila modifikovanou biuretovou metodu s gelovou filtrací k oddělení interferujících nízkomolekulárních peptidů. Po proběhlé biuretové reakci se oddělí opět gelovou filtrací volné ionty Cu2+ od mědi vázané na bílkoviny a vázaná měď se pak stanoví reakcí
s dietyldithiokarbamátem. Postup není použitelný pro rutinní praxi.

Zákalové metody (turbidimetrie, nefelometrie) předpokládají tvorbu jemných homogenních sraženin proteinů (řízená velikost částic), které rozptylují dopadající světlo. Precipitace se provádí sulfosalicylovou nebo trichloroctovou kyselinou, případně protilátkami. Velmi citlivá je turbidimetrie při 330 nm. Tyto metody se provádějí hlavně při stanovení celkové bílkoviny v moči a mozkomíšním moku. Reakce je lineární od meze stanovitelnosti 0,1 g/l do 3,5 g/l (při srážení kyselinou chlorovodíkovou je reakce ještě 10-krát citlivější).
Je možné také vysrážet celkovou bílkovinu v moči a mozkomíšním moku kyselinou trichloroctovou, precipitát rozpustit v biuretovém činidle a poté stanovit podobně jako sérum. Linearita této reakce je 0,11 - 1,6 g/l.

Schopnost proteinů vázat barviva jako je Amidočerň 10B a Coomassie Brilliant Blue se využívá k fotometrické detekci. Coomassie Brilliant Blue váže protonizovanou aminoskupinu aminokyselinových zbytků polypeptidového řetězce a maximum absorbance barviva 465 nm poklesne a 595 nm vzroste. Metoda je rychlá, jednoduchá a citlivá, ale má úzkou oblast linearity (0,002 - 1,2 g/l) a interferují při ní povrchově aktivní látky (Triton, laurylsíran sodný). Preciznost v sérii CV kolem 2 %, mezi sériemi 7 %. Tato metoda se používá ke stanovení celkové bílkoviny v moči, mozkomíšním moku, mateřském mléce a při vybarvování proteinových pásů po elektroforéze. Coomassie Brilliant Blue G-250 má podstatně vyšší citlivost vůči albuminu ve srovnání
s globuliny, takže v případě vyššího zastoupení globulinů jsou výsledky podhodnoceny.
Úzkou oblast linearity má také barevná reakce s tanin-chloridem železitým (linearita 0,03 - 1,0 g/l).
Vhodnější je reakce při které pyrogalolová červeň s molybdenanem sodným tvoří komplex s bílkovinou absorbující při 600 nm (linearita 0,01 - 16,0 g/l). Preciznost v sérii CV < 4 %, mezi sériemi < 10 %. Použití vhodného proteinového kalibrátoru umožňuje dosáhnout velmi dobré korelace mezi metodami s Coomassie Brilliant Blue a pyrogalolovou červení (r = 0,98 až 0,99).
Toleranční limit EHK pro stanovení bílkoviny v moči: CV 24 %.

Lowryho metoda se používá ke stanovení nízkých koncentrací proteinů. Po reakci s alkalickým roztokem měďnatých iontů se přidá Folin a Ciocalteu fenolové činidlo. Při 745 až 750 nm se sleduje redukce fosfowolframové a fosfomolybdenové kyseliny na wolframovou a molybdenovou modř při vzniku komplexů Cu2+ zejména s tyrosinem a tryptofanem (cystin, cystein a histidin také reagují, ale v menším rozsahu). Lowryho metoda je stokrát citlivější než biuretová metoda a dovoluje stanovit koncentrace 10–60 mg/l. Používá se ve výzkumu, ale nikoliv rutinně, protože má nízkou specifitu a přesnost. Také zastoupení tyrosinu kolísá
v bílkovinách až pětinásobně a obě používaná činidla mají krátkou dobu použití. Nebílkovinné příměsi mohou způsobit pozitivní chybu 30 – 90 mg/l.

Pro semikvantitativní vyšetřování bílkovin proužky s impregnovanými vlákny se používá políčko impregnované tetrabromfenolovou modří pufrovanou na pH 3,0. Není to ideální označení pro příslušné reagenční políčko, protože většina reagenčních proužků detekuje albumin. Reakce je negativní v přítomnosti některých proteinů, např. Bence-Jonesovy bílkoviny a odezva na globuliny je podstatně slabší ve srovnání s albuminem. Analýza je založena na využití tzv. proteinové chyby indikátoru pH, kdy v nepřítomnosti albuminu je proužek žlutý. Albumin (resp. jeho aminoskupiny) poskytuje s barvivem komplex a barva políčka se mění přes žlutozelenou v zelenou až modrozelenou. Tato reakce probíhá při pH < 3,5 a okyselení moče je zajištěno pufrem z impregnace políčka. Citlivost metody se pohybuje mezi 0,15 až 0,2 g/l. Je-li moč alkalická (pH 8,0), musí se okyselit zředěnou kyselinou octovou na pH 5 – 6 a analýzu je třeba zopakovat s novým proužkem. Při důkazu albuminu interferují chininové a cholinové preparáty. Falešně pozitivní výsledky jsou při kontaminaci moče vaginálním nebo uretrálním sekretem, je-li moč silně alkalická nebo odběrová nádobka kontaminována dezinfekčními prostředky či saponáty. Falešně pozitivní výsledky jsou při silném okyselení moče (např. před stanovením vápníku).
Semikvantitativní důkaz albuminu proteinovou chybou indikátoru není dostatečně spolehlivý a proto se pozitivní reakce potvrzuje srážecí reakcí bílkovin pomocí několika kapek 20 % kyseliny sulfosalicylové či jinými srážecími postupy (kyselina trichloroctová nebo pikrylsulfonová; polyvalentní antiséra), případně barevnou reakcí
s pyrrogalolovou červení.

Koncentraci celkové bílkoviny snižují: alkalizace (důkaz sulfosalicylovou kyselinou), hořečnaté ionty, kyselina boritá, plazmaferéza, aj.
Koncentraci celkové bílkoviny zvyšují: α1-kyselý glykoprotein, alkalizace (důkaz Albustixem), amikacin, amikin, bakteriurie, bilirubin, cyklosporiny, dirastan, dopamin, ejakulát, fenoly, fluorescein, fluoridy, framykoin, gentamycin, hemoglobin, heroin, homogentisová kyselina, chlorpromazin, insekticidy, kadmium, krezol, kvarterní amoniové sole, kyselina boritá, β lipoproteiny, lysozym, měď, oxaláty, pendepon, penicilin, salicyláty, sirovodík, streptomycin, Tamm-Horsfallova bílkovina, tensamin, tetracykliny, transferin, trypsin, tymol, vínan, zákal, aj.