Textarin/ecarin ratio

Vyšetření se provádí z citrátové plazmy chudé na destičky, která se získá odběrem žilní krve do zkumavky s citrátem sodným v poměru 1 díl citrátu + 9 dílů krve. Koncentrace citrátu se doporučuje v rozmezí 0,105 až 0,109 mol/l. Při venepunkci je doporučeno používat jehlu o průměru 0,7 až 1,0 mm (tenčí jehly mohou způsobit hemolýzu a předčasnou aktivaci destiček a koagulačních faktorů) a je nutné vyvarovat se použití škrtidla > 1 min. Doprava materiálu do laboratoře do 2 h. Vzorek se centrifuguje 15 min při 3000 g, volíme dvojitou opakovanou centrifugaci a oddělujeme plazmu 0,5 – 1,0 cm nad suspenzí erytrocytů, jelikož trombocyty obsahuji fosfolipidy a v jejich přítomnosti by mohl být test zkreslený. Počet trombocytů v plazmě má být < 10⁴/µl. Alternativou je filtrace plazmy přes mikronový filtr s hustotou 0,22 µm. Vzorek plazmy lze skladovat 4 h při 0 – 8 °C nebo 3 měsíce při -70°C . Pro následné zpracování zmrazené plazmy je nutno plazmu rozmrazovat po dobu 5 min ve vodní lázni při 37 °C, šetrně promíchat a ihned provést měření, nebo skladovat < 2 h při 2 – 8°C. Rozmražené vzorky plazmy nelze opakovaně zamrazovat.

Při zpracování je nutné vyloučit lýzu trombocytů.

Jedná se o jeden z konfirmačních testů na lupus antikoagulans, který je založený na rozdílné závislosti dvou hadích jedů na fosfolipidech, při aktivaci koagulace. Textarin je bílkovinná frakce izolovaná z jedu australského hada Pseudonaja textilis, který přímo aktivuje protrombin, ale vyžaduje faktor V, Ca²⁺ a fosfolipidy. Ecarin je jed z hada Echis carinatus, který aktivuje protrombin na meizotrombin v nepřítomnosti fosfolipidů. V přítomnosti lupus antikoagulans je textarinový koagulační čas prodloužený díky závislosti na fosfolipidech, ale ecarinový koagulační čas prodloužen není. Test se provádí následovně: vyšetřovaná plazma, chudá na destičky, se inkubuje s hadím jedem při 37°C a po aktivaci se přidá 0,025mol/l chloridu vápenatého. Zaznamenává se čas koagulace. Výsledek se udává, jako poměr koagulačních časů textarin/ecarin.

V přítomnosti inhibitorů protrombinu, nebo jeho nedostatku jsou prodlouženy oba koagulační časy. Inhibitor faktoru V prodlužuje textarinový čas. Ostatní inhibitory koagulačních faktorů, nebo jejich nedostatek, textarinový čas neprodlužuji. Přítomnost lupus antikoagulans naznačuje index > 1,3.

Nejčastější typ detekce je optický (turbidimetrie) a mechanický (kovová kulička v magnetickém poli). Obě metody mají své výhody i nevýhody. Optické metody jsou finančně méně náročné, jelikož stačí převážně 150 µl reakční směsi v kyvetě, kdež to u mechanické detekce je nutný objem větší, aby se kulička celá ponořila. Mechanická detekce na druhé straně není závislá na zbarvení, resp. zakalení vzorku (ikterické, chylózní, hemolytické vzorky), což lze u optické metody minimalizovat detekci při 671 nm. U optických analyzátorů je nutné zohlednit i způsob odečtu času koagulace z reakční křivky. Většina přístrojů volí inflexní bod křivky, nebo 50 % absorbance, kde počáteční absorbance se bere jako 0 % a konečná 100 %. Nejvhodnější je způsob odečtu matematickým zpracováním křivky a to její druhou derivací, kde koagulační čas se odečte v maximu druhé derivace původní reakční křivky. Je to část křivky, kde dochází k největšímu nárůstu koagula.

Zkrácení koagulačních časů: špatný odběr vzorku (aktivace koagulace), špatné zpracování vzorku (nedostatečná centrifugace, přítomnost trombocytů, lýza trombocytů).

Prodloužení koagulačních časů: afibrinogenemie, heparin (možné odstranit začleněním polybrenu – katexového polymeru), nedostatek protrombinu a protilátky vůči protrombinu prodlouží oba testy; protilátky vůči faktoru V prodlužují textarinový čas,.