Fecal occult blood test, FOBT, stool occult blood; guaiac smear test, fecal immunochemical test, FIT

Stanovení se provádí ve stolici. Zvláštní příprava pacienta není nutná, ale doporučuje se 3 dny před odběrem vysadit červené maso a vitamin C a 7 dní před odběrem acylpyrin a ibuprofen. Ke stolici se obvykle přidává roztok kyseliny citrónové a dextrózy.
Stabilita: 2 – 8 °C 5 dní, vzorek lze skladovat i na suchém ledu.

Prakticky všechny testy na okultní krvácení prováděné v ČR jsou kvalitativní.
Pro screeningový postup je doporučeným testem chemický test, založený na pseudoperoxidázové reakci hemoglobinu s guajakovou pryskyřicí. Substrátem byl původně kancerogenní benzidin, později o-tolidin nebo tetrametylbenzidin. Guajaková pryskyřice obsahuje guajakol (o-metoxyfenol), který je v redukované bezbarvý
a po oxidaci se zbarvuje do modrozelena. Oxidace probíhá peroxidem vodíku, katalyzátorem je hemoglobin
s pseudoperoxidázovou aktivitou. Souprava, která obsahuje 3 testy se dvěma okénky. Pacient odebere vždy dva různé vzorky ze tří po sobě následujících stolicí, které rozetře na označená místa testu, testovací okénka uzavře a testy odešle do laboratoře. Činidlo se aplikuje na opačnou stranu okének. Hodnocení je pozitivní nebo negativní. Citlivost testu je přibližně 5 mg hemoglobinu/g stolice. Falešná pozitivita při srovnání
s imunochemickými testy je nulová. Pokud se test nezpracuje brzy, může dojít na políčku k vyschnutí. Při rehydrataci falešná pozitivita stoupne ze 2 – 3 % na 8 – 16 %.
Chemický test pro domácí použití používá jako substrát tetrametylbenzidin a provedení trvá 2 minuty. V případě pozitivity vzniká modrozelené zbarvení. Citlivost 2 mg hemoglobinu na 100 ml vody.

Imunochemické testy mají ovlivněnou svou senzitivitu (pozitivní průkaz) rozdílnou degradací obou složek hemoglobinu. Globin je degradován rychleji, degradace hemu je pomalejší. Využívají se čtyři principy: reverzní pasivní hemaglutinace, latexové imunoprecipitace, radiální imunodifúze a imunoafinitní chromatografie. Citlivost imunochemických testů je výrazně vyšší než u chemických testů. Mez detekce je < 0,1 mg hemoglobinu / g stolice. Falešná pozitivita imunochemických testů je 4 – 7 %. Imunochemické testy nereagují
s léky, červeným masem a deriváty hemu.
V poslední době je nejrozšířenější imunoafinitní chromatografie. Laboratorní zpracování vzorku spočívá
v extrakci a aplikaci kapky extraktu na testované políčko. Výsledek je 1 nebo 2 barevné proužky, které detekují přítomnost pouze protilátky s barevným markerem (negativní test, 1 barevný proužek) nebo vznik komplexu antigenu s protilátkou (pozitivní test, 2 barevné proužky).

Další postup je dražší a sleduje fluorescenci porfyrinových derivátů hemu. Zatímco porfyriny nereagují
s peroxidázou, hemoglobin a volný hem s ní reaguje.

Byla také použita automatizovaná metoda hmotnostní spektrometrie, kdy je desorpce a ionizace matrice pomocí laseru s následným sledováním v analyzátoru doby letu (MALDI-TOF MS). Pro MS jsou zpracovány
α- a β-řetězce hemoglobinů rozpustných ve vodě po reakci s nasyceným roztokem 4-hydroxy-α-kyanoskořicové kyseliny. Citlivost je 10 – 100-krát vyšší než u chemického guajakového testu.

Studie v posledních letech testují několik imunochemických analyzátorů pro kvantitativní stanovení krve ve stolici, většina je japonské výroby. Analyzátory stanovují hemoglobin imunochemicky. Používá se metoda nepřímé aglutinace. Magnetické částice želatiny jsou potažené králičí protilátkou vůči lidskému hemoglobinu. Aglutinace je urychlována magnetickým polem směrem ke dnu kónické jamky. Destička se pak vychýlí o 60°
z horizontální polohy, aby se uvolnily volné magnetické částice. V přítomnosti hemoglobinu zůstávají částice
ve špičce jamky a řada volných magnetických částic je kratší. Délka této řady se měří reflexní fotometrii při
690 nm. Citlivost systému je 0,1 – 0,2 mg hemoglobinu / g stolice, tj. 20 mg Hb/l.

Falešnou negativitu způsobují: askorutin, vitamin C, aj.
Falešnou pozitivitu způsobují: acylpyrin, anopyrin, antacida, fluoridy, dusitany,hemoglobin (maso, krev), histamin, ibuprofen, intenzivní cvičení, kolchicin, nesteroidní antiflogistika, olovo, peroxidázy (kořenová zelenina), ryby, steroidy, šťavelany, aj.